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标题: 我养的是不是间充质干细胞（附图）？？？急，在线等！！！！！ [打印本页]

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-10 19:16 标题: 我养的是不是间充质干细胞（附图）？？？急，在线等！！！！！

本帖最后由细胞海洋于 2010-11-11 18:02 编辑

面是我养的骨髓间充质干细胞，2周龄SD大鼠，低糖DMEM培养基，全骨髓贴壁法，一只老鼠2根胫骨2根腓骨，种在25cm2培养瓶，3天后第一次换液，原代5-6天就可长满了，以后3-4天传一代，传2代后今天拿去测流式，CD29 CD34 CD44 CD45都是阳性，为什么啊？是我的细胞不是间充质细胞吗？还是因为试剂问题？？？去年我师姐测的结果是CD34 CD44 阳性，CD29 CD45阴性，与文献也不符，后面拿来诱导成骨成功了，怎么回事啊？
第一张，原代第五天3 z$ x' c. C# Z6 U3 v, I
[attach]16680[/attach]( X4 _9 n. ^. v5 g8 W" l
这张是第二代3天的3 @. m, A8 U. ~) a8 z
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" ~! U+ U) ]- x( |. l% U
这是以前养的，传到3代就变了7 j6 w- p8 ^( L
测CD29 34 44 45结果结果也是全阳性
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作者: zoe 时间: 2010-11-10 19:54

看不到你的附图。你用的是同型对照还是裸细胞对照？各个指标的比例大概多少？

作者: 若兰汀 时间: 2010-11-11 16:56

首先你的SD大鼠选取2周龄的不知道符不符合实验需求，因为我做的小鼠是4-6周龄。不同周龄的小鼠或大鼠骨髓中各组分所占比例不同，所以分离时就要注意。从你说的来看你上机测试的细胞肯定含有造血干细胞，你的纯化率时多少呢？考虑一下用percoll分离液吧。如果纯度不够会影响你后续实验的。实在不行就买细胞株吧，我养的是买的细胞株，细胞状态一直都很好。祝你好运

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-11 18:58

我上面写错了，取的是胫骨跟股骨，不是腓骨，呵呵~~

作者: zoe 时间: 2010-11-11 19:28

我将刚分离出来的大鼠骨髓单个核细胞上流式，CD34的阳性率也就0.2-2%左右，你的细胞传代后CD34阳性率还很高吗？有多少？

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-12 15:43

我拿细胞去流式找那边的主任测，他做了个散点图，然后给我分析上面的一群细胞，就说这群细胞这四个指标都是阳性的……3 @) X3 d. S3 C! ^# K0 v+ ?
今天其他瓶子的细胞满了，都没心情做下去了，不知道是不是间充质干细胞，继续传下去浪费培养基又浪费瓶子，好烦啊……

作者: zoe 时间: 2010-11-12 16:09

能否看看你的流式图？

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-12 17:34

刚从实验室拿相机回来，没电了，充好电照相再传上来，这个图是第二次测的，这回测的因为打印机坏了，图没打印出来，不过结果和第二次差不多的。

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-12 20:07

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作者: suning 时间: 2010-11-13 22:01

形状像，是不是抗体的原因

作者: zoe 时间: 2010-11-13 23:06

流式图呢？我怎么看不到？

作者: lpf19851105 时间: 2010-11-14 09:21

照了流式的图片，但是上传不了……

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