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标题: 细胞冻存与复苏 [打印本页]

作者: 皮搋子 时间: 2010-11-11 23:00 标题: 细胞冻存与复苏

冻存：选择细胞状态最好时冻存，冻存液10%DMSO，30%血清，60%培养液，最好是配好了放于4度，待温度降为4度后再用于重悬细胞。而后用包布包好，放于-20冰箱2h，再-80过夜，从包布中取出放于液氮中。
   这样能够保证细胞有较高的存活率。; T9 y  L( U/ x' c3 f, @$ M% z
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   复苏：准备好37-40度水浴，将细胞从液氮中取出，迅速置于水浴中不断晃动，待全部融化后取出，准备一支离心管加2-3ml培养液，将细胞加入混匀后1000rpm离心5min，弃上清，完全培养液重悬。- w3 Y( P5 B  }# P
   这样操作对复苏细胞来说条件比较温和。
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   希望对刚开始学习养细胞的朋友有帮助！！

作者: xuehu20 时间: 2010-11-12 09:19

我们实验室在复苏细胞时一般为：水浴锅中不断摇晃，待冻存管中冰块颠倒时能滑下来时，迅速消毒置于超净台中，提前准备一支15ml离心管加入10ml4度预冷的培养液，将细胞加入混匀后1800rpm离心10min，弃上清，完全培养液重悬

作者: 清影 时间: 2010-11-17 17:41

楼上说的很详细，只是离心速度有些大吧，在1000-1200rpm下离心10min。确保速度快和冻存管的密封良好

作者: lipd09@mails 时间: 2010-11-17 22:52

我感觉应该是用10~20ml的培养液做为稀释液吧。

作者: 流云阿凯 时间: 2010-11-18 10:38

我们实验室的冻存液的配方是培养基：血清：DMSO=7:2:1，经过长期的实验效果也是不错的，大家可以试一下啊！

作者: 黑眼豆豆 时间: 2010-11-21 14:44

sigam产品推荐的是 7：2：1

作者: andyz0922 时间: 2010-11-21 20:17

如果在复苏时候不用离心直接接种到20%FBS 培养基里第二天换液可以吗？

作者: 心灵旅者 时间: 2010-11-30 13:23

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-11-30 14:47

复苏会遇到小爆破！注意注意！！！

作者: liujucool 时间: 2010-11-30 14:59

放液氮时拧不紧复苏时容易爆炸很危险8 O( K! B& g4 I1 U. l: t4 [/ V5 V, Z
我们实验用的冻存液是DMSO：FBS=1:9的比例细胞冻存了还没有复苏过不知道这样对细胞存活率影响大不大

作者: liqinzhan 时间: 2010-11-30 14:59

现在用的一般都是塑料冻存管，恒温水浴箱的温度基本都调至40度以上，1--2min内完成复温，这样能提高细胞的存活率

作者: zxc 时间: 2010-11-30 19:45

大家说的都很详细，比书里写的要简练而且实用很好。楼上说复苏不离心我做过，就种到瓶里不太好就是有些杂质，会影响细胞的生长，而转天换夜细胞应该还不能很好的贴壁，不建议那样做。

作者: crystal 时间: 2010-11-30 21:46

明天去看，要是我的细胞没死的话，我也要冻存了，整天养起也特没劲的！
我师兄的实验笔记上显示他配的冻存液加了培养基的，可我同学说不用加，直接用净血清加二甲亚风！0 }% {- f) v8 M5 r
都不知道到底应该相信谁！

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