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标题: 大家帮忙看看这是什么污染呢？？？ [打印本页]

作者: goodyezi 时间: 2010-11-13 14:42 标题: 大家帮忙看看这是什么污染呢？？？

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如上图片，培养液浑浊，但已经检测不是细菌污染。大家帮忙看下是什么污染呢？可能的污染途径是什么呢？？

作者: sun_happone 时间: 2010-11-13 18:16

会不会是支原体污染呢

作者: wangyuell 时间: 2010-11-18 20:36

应该是支原体感染

作者: 雾里看花250 时间: 2011-2-12 09:39

还没遇到过这种情况

作者: syl82 时间: 2011-2-15 19:21

本帖最后由细胞海洋于 2011-2-15 23:30 编辑 : l, T0 r! H3 n2 j% w4 h
. ]8 g/ G4 ?, w0 m) o

注意事项 - G- q" Q1 W- O2 b5 w8 o
丝裂霉素C在操作时要避光，避免其分解。
ES细胞倾向于聚集生长，因此在复苏时，要选择好培养皿的规格 4 j4 C# j# x3 ~4 ^& f _
ES细胞不能长的太满，应避免使各个克隆之间接触，以免发上分化。 ; r- w( P8 M+ s% M5 n% z9 D
为避免水或血清带来的污染，对血清应进行支原体检测，配好的培养基要进行污染测试。
环境：细胞培养需要一个无菌的环境，所以尽量是在一个独立的房间里进行。要求配有空气净化系统，能够对整个房间进行杀菌的紫外灯。 : S6 `4 t5 S2 E& ^# x
设备：二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、水浴锅、离心机、实验桌、移液器等。 + [5 Y9 a2 Q4 `% {
实验耗材：一次性的细胞培养皿或细胞培养瓶、15ml或50ml离心管、脱脂棉花、封口膜等。
试剂：干细胞对培养条件要求较高，可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。
试剂的配制：
DMEM培养基: 去离子水中含1.34% DMEM粉末、0.22%NaHCO3
MEF培养基：DMEM培养基中含10%FBS, 1000u/ml 青霉素, 1000g/ml 链霉素 * x! y* G# y& u8 } _2 b1 z5 R7 m! c
ES培养基: ES培养基：DMEM培养基中含15% FBS，1×106 U青霉素，1×106 g链霉素，1mM丙酮酸钠, 0.1mM 非必须氨基酸, 2mM 谷氨酰胺, 0.1mM 巯基乙醇, 1000u/ml 白血病抑制因子
D-Hank's： 0.8%NaCl, 0.04%KCl, 0.035%NaHCO3, 0.006%KH2PO4, 0.005325%Na2HPO4, 0.001%酚红 $ y& L( E8 y2 U% u, @+ R' m% O
0.1%明胶: D-Hank’s溶液中含0.1%的明胶
ES细胞冻存液：90% ES培养基，10% DMSO
MEF细胞冻存液：90% MEF培养基，10% DMSO
Feeder细胞冻存液：90% FBS ，10% DMSO
丝裂霉素C: 根据产品说明书来配制

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