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标题: 有没有人做过用慢病毒转染ips细胞的 [打印本页]

作者: nan123456 时间: 2010-11-16 11:30 标题: 有没有人做过用慢病毒转染ips细胞的

兄弟正在做了，有高人指教一下

作者: 细胞海洋 时间: 2010-11-16 11:31

说一下你的具体问题

作者: nan123456 时间: 2010-11-16 11:37

我的问题是用包装出来的慢病毒，纯化后，（慢病毒带有我需要的基因片段），转染IPS细胞，通过筛选得到单克隆。

作者: 12846168 时间: 2010-11-16 12:09

LZ，你问个问题都问不清，做的什么实验？

作者: nan123456 时间: 2010-11-16 12:17

我就是用慢病毒转染IPS细胞，转染后筛选，慢病毒含有我要的基因片段，什么地方不清楚呢？

作者: FYH 时间: 2010-11-16 17:08

与慢病毒感染ES细胞程序基本一样

作者: nan123456 时间: 2010-11-16 19:06

具体点行不行呢?多给点建议

作者: daviddow 时间: 2010-11-16 20:02

lentivirus转染细胞有很多步骤，你那里有问题？你说的详细些，大家也好给你建议

作者: 王乾 时间: 2010-11-16 20:31

1，选择合适的病毒载体和包装质粒
2，传代293T，10cm的皿500万细胞，传代后12-16小时转染，每种质粒我一般转5-10ug，最好用钙转。% \( ]" [' W; Q" S J4 J! z* ?
3，6-8小时换液
4，换液后36-48小时收病毒，尽量避免培养基发黄。滴度一般怎么也能到10^6。2 t1 I% H2 T+ V4 o; F. A. b
5，感染前6小时传ES，我一般一个六孔板的一个空传2万个细胞。6 g% C. }* h2 x! b% [7 K5 u) a
6，感染，轻轻吸掉ES的培养基，换成病毒液，加入polybrane。: u7 X* Q3 } z9 N; b
7,8-12小时换掉病毒液，72小时后测流式。

作者: nan123456 时间: 2010-11-17 15:53

1 慢病毒怎么纯化滴度高？我是用的FuGene转染的，我纯化是直接通过超速离心获得病毒颗粒9 q5 R8 ^/ {$ x1 H! a. K3 Z
2 我的ips本身带绿色荧光的，所以我转染后用荧光素酶筛选，因为质粒上带有fluc，可是每次做的转染效率不高，检测不出来

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