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标题: 关于原代培养 [打印本页]

作者: kogguli    时间: 2010-11-19 16:38     标题: 关于原代培养

我做大鼠肾小球系膜细胞的原代培养,一个月了也没有长满一瓶,生长很慢求指点
作者: 267318024    时间: 2010-11-19 18:05

把你的培养方法描述一下,还有你的换液时间,培养基的种类以及取的方法等介绍一下,这样大家才能帮你找到原因,你这样说太过于抽象了!
作者: manybit    时间: 2010-11-19 21:00

分析:(1)细胞消化下来了多少?(2)换液情况如何?一般2-3天换一次液
作者: kogguli    时间: 2010-11-25 16:50

我是这样做的,取出大鼠双肾,然后把皮质部分减下来,在150目钢筛上研磨,取滤液,然后把滤液过200目刚筛,取筛上,然后用胶原酶消化半小时后接种。培养的肾小球不是直接培养的细胞,大概三天吧细胞爬出来,但是一直长不满一瓶,因为培养基的夜色不怎么改变,所以换夜不勤,大概四五天吧,看文献这么做的,自己做的不太理想,求高手指教,感恩节之际,谢谢大家
作者: kogguli    时间: 2010-11-25 22:47

回复 3# manybit
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' ?* c  T; a1 D% }我是这样做的,取出大鼠双肾,然后把皮质部分减下来,在150目钢筛上研磨,取滤液,然后把滤液过200目刚筛,取筛上,然后用胶原酶消化半小时后接种。培养的肾小球不是直接培养的细胞,大概三天吧细胞爬出来,但是一直长不满一瓶,因为培养基的夜色不怎么改变,所以换夜不勤,大概四五天吧,看文献这么做的,自己做的不太理想,求高手指教,感恩节之际,谢谢大家( {* \4 D5 x( a1 b* {2 T
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作者: 痞子的烟头    时间: 2010-11-26 09:11

原代培养,一定要及时传代及换液,哪怕如你所说,细胞长的不满或状态不好,不然一直这样放着,细胞只会越来越少,最终死亡,怕密度小,可以接种在小的DISH中,还有血清浓度要合适
作者: kogguli    时间: 2010-11-26 16:49

回复 6# 痞子的烟头
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# }9 L( H  y1 Y9 O7 f  v    这样说的话就是即使培养液的颜色不怎么变也要两三天换一次,是不是长得不太慢也可以考虑消化下来传代,我感觉就是那个密度不怎么长了,但是不如文献上的照片那么密集




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