干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 关于原代培养 [打印本页]

作者: kogguli 时间: 2010-11-19 16:38 标题: 关于原代培养

我做大鼠肾小球系膜细胞的原代培养，一个月了也没有长满一瓶，生长很慢求指点

作者: 267318024 时间: 2010-11-19 18:05

把你的培养方法描述一下，还有你的换液时间，培养基的种类以及取的方法等介绍一下，这样大家才能帮你找到原因，你这样说太过于抽象了！

作者: manybit 时间: 2010-11-19 21:00

分析：（1）细胞消化下来了多少？（2）换液情况如何？一般2-3天换一次液

作者: kogguli 时间: 2010-11-25 16:50

我是这样做的，取出大鼠双肾，然后把皮质部分减下来，在150目钢筛上研磨，取滤液，然后把滤液过200目刚筛，取筛上，然后用胶原酶消化半小时后接种。培养的肾小球不是直接培养的细胞，大概三天吧细胞爬出来，但是一直长不满一瓶，因为培养基的夜色不怎么改变，所以换夜不勤，大概四五天吧，看文献这么做的，自己做的不太理想，求高手指教，感恩节之际，谢谢大家

作者: kogguli 时间: 2010-11-25 22:47

回复 3# manybit . w0 L: L9 D; }( P% e
/ t. ?- E) r& V" Q
我是这样做的，取出大鼠双肾，然后把皮质部分减下来，在150目钢筛上研磨，取滤液，然后把滤液过200目刚筛，取筛上，然后用胶原酶消化半小时后接种。培养的肾小球不是直接培养的细胞，大概三天吧细胞爬出来，但是一直长不满一瓶，因为培养基的夜色不怎么改变，所以换夜不勤，大概四五天吧，看文献这么做的，自己做的不太理想，求高手指教，感恩节之际，谢谢大家
本文来自干细胞之家 - 中国干细胞研究员的交流论坛，http://www.stemcell8.cn，详情请看：http://www.stemcell8.cn/thread-30409-1-1.html

作者: 痞子的烟头 时间: 2010-11-26 09:11

原代培养，一定要及时传代及换液，哪怕如你所说，细胞长的不满或状态不好，不然一直这样放着，细胞只会越来越少，最终死亡，怕密度小，可以接种在小的DISH中，还有血清浓度要合适

作者: kogguli 时间: 2010-11-26 16:49

回复 6# 痞子的烟头
- B4 H' m% _- N% ]3 j% Q7 D
+ w5 I5 c0 e1 h3 B" W
这样说的话就是即使培养液的颜色不怎么变也要两三天换一次，是不是长得不太慢也可以考虑消化下来传代，我感觉就是那个密度不怎么长了，但是不如文献上的照片那么密集

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)