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标题: 小鼠骨髓间充质干细胞传代不佳，很着急！ [打印本页]

作者: feiyang 时间: 2010-11-21 10:51 标题: 小鼠骨髓间充质干细胞传代不佳，很着急！

向大家请教。我养的小鼠骨髓间充质干细胞，传代后长的不好。我的过程是这样的，原代细胞长的很好，要等20天才能达到90％融合，这时传代，0.25％胰酶EDTA消化5分钟，细胞形态变圆，但是仍然有大量细胞贴在壁上，拍打也拍打不下来，这时我用细胞刮子刮剩下的细胞，再一起分瓶培养，但是这样传代后细胞长的不好。我不知道是哪里出了问题呢，是不是细胞刮子损伤细胞，但是不用刮子大部分细胞还贴在壁上啊，急死了！请大家帮帮我！

作者: 267318024 时间: 2010-11-21 12:48

培养基是什么样的，介绍一下，换液的方法是？多少天一次？

作者: andyz0922 时间: 2010-11-21 20:23

消化不下来的顽固细胞要么不是msc 要么就是老化的msc
下次不用刮子刮消化后你用PBS洗一下  然后加入培养基再培养 7 d3 u+ I( ~1 `
过些天就知道这些细胞大多是巨噬细胞形态  （呵呵我试过）

作者: andyz0922 时间: 2010-11-21 20:25

还有你的细胞要养20天吗？　一般来说　细胞体外超过　一周就很难消化的5 i) Y$ Q- B3 O; ^1 g( s
你下次接种时候种的密集一些　就可以避免了吧

作者: apengforever 时间: 2010-11-21 20:30

可能你培养方法有问题，我养过大鼠的BMSC，小鼠的应该差不多，小鼠的MSC原代好像不用那么久吧，还有就是消化的时候，消化之前用PBS先洗一下，再加胰酶，不要直接加，PBS洗之后，再加胰酶应该一分钟之内就可以了，如果有些贴壁的可能已经不是MSC了，直接丢弃就行了。
供参考。

作者: feiyang 时间: 2010-11-22 02:59

非常感谢大家，我是新手，好多不懂呢！再请问大家，一只小鼠股骨、胫骨各2条，取出来的骨髓细胞，是放在25cm^2培养瓶中还是75cm^2瓶中养好呢？前者的话细胞密度大一点，是不是可以快点达到80－90％的融合，这样传代可以早一点，是这样吗？

作者: 彩云13_226 时间: 2010-11-22 03:58

当然是25cm的，也可以用10cm的dish

作者: feiyang 时间: 2010-11-22 04:55

非常感谢大家，我是新手，好多不懂呢！再请问大家，一只小鼠股骨、胫骨各2条，取出来的骨髓细胞，是放在25cm^2培养瓶中还是75cm^2瓶中养好呢？前者的话细胞密度大一点，是不是可以快点达到80－90％的融合，这样传代可以早一点，是这样吗？

作者: feiyang 时间: 2010-11-22 07:31

25平方cm、50平方cm的，用哪一个比较合适呢？如果用25平方cm的，虽然达到融合会很快，但是细胞数量会少吧，是不是呢？

作者: 呆呆鱼 时间: 2010-11-22 11:06

开始时候用25cm2的，让细胞赶快长起来，然后换成50cm2或75cm2的传代分瓶

作者: feiyang 时间: 2010-11-23 02:45

有一种理论认为开始就用大的培养瓶。如果开始用25cm2的培养瓶，虽然细胞长的快，但是这里面有很多不是MSC的细胞也一起长起来，可能会对后期细胞的生长及纯化不利。大家是怎么认为的呢？谢谢！

作者: 644414915 时间: 2013-2-2 21:29

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巨噬细胞是什么形态？

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