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标题: 如何提高转染率？ [打印本页]

作者: zb_ming 时间: 2010-11-25 09:51 标题: 如何提高转染率？

大家都知道，转染问题一直是影响细胞克隆的一个关键问题，大家有什么高见？洗耳恭听。

作者: ybshan1985 时间: 2010-11-25 10:14

应该看你用什么方法转染什么细胞了吧

作者: zuming 时间: 2010-11-25 10:16

转染效率和被转颗粒性质、细胞种类还有转染方法都有密切关系。
我一般用的多的是电转染，延长电转染持续时间和频率而不加大电压有利于电转染;电压高了对细胞伤害还是很大的。最好选用处于G2/M期的细胞进行电转染。
有文章说孵育温度影响基因的转染效率;电转染前后低渗条件有利于电转染。这方面我就没试过了。你可以试试。0 d4 Z4 d9 {4 t; u/ N3 K
脂质体转染用过Lipofectin 2000，其效率也是因细胞而异的。

作者: zb_ming 时间: 2010-11-25 10:25

电转染还是比较新颖的，我也用过，好像转染率也挺低，你的建议不错，值得试试。

作者: crystal 时间: 2010-11-25 20:00

我也要做转染，但是不知道到时候就是稳定转染好还是瞬时转染好，因为瞬时转染的话蛋白表达只有几天，稳定转染时间长，但是也不太好做，正大犹豫中！我也是用的脂质体2000.

作者: crystal 时间: 2010-11-26 11:52

只有确定课题需要持续做下去，非稳定转染不行的时候用稳定转染,为什么呢，技术上两者都可以，而且稳定转染的转染效率更有可比性.但是从消耗的精力和时间上，前者要合适的多.稳定转染最少要两三个月，长则半年一年，而且不一定能得到稳定表达的细胞株，这是关键.

作者: siyue13 时间: 2010-11-29 22:05

本帖最后由 siyue13 于 2010-11-29 22:06 编辑

脂质体不好转染的可以试试罗氏的fugene，谁用谁知道 |) g% w( [: ?6 N2 Q/ |9 q

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