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标题: 显微镜下怎取单个细胞？ [打印本页]

作者: nculsa747 时间: 2010-11-25 13:37 标题: 显微镜下怎取单个细胞？

要做单细胞分析，首先是要分离出单个细胞。但在显微镜下直接用手拿着移液枪进行操作非常困难，手一抖，细胞就不知跑哪去了。我们想着找个支架把枪给固定起来，这样就简单多了。不知道大家是如何做到的？大家踊跃发言哈！谢谢！！！

作者: zuming 时间: 2010-11-25 13:50

用移液枪操作？
不是可以用显微操作系统嘛，如果是做膜片钳都要用到的。

作者: nculsa747 时间: 2010-11-25 14:13

回复 2# zuming - P5 [" \; o" o: u( o5 a1 z
! m. R, D' |) P: P% A
/ T. w' C0 [: {3 b" w
显微操作系统未免太牛刀小用了吧？我们只要用移液枪吸出一个单细胞就行了！手工分离完全可以做到，不过要多花费些时间。

作者: stemcellfamily 时间: 2010-11-25 15:16

必须得用显微操作哇，用移液枪怎么行哦？用直径达到显微级别的吸管去吸取单个细胞

作者: cony 时间: 2010-11-25 19:46

用自己拉制的毛细管挑和吸嘛

作者: 鹤顶宏 时间: 2010-11-27 18:14

移液枪太笨重了,还是用拉的毛细管套上乳胶管操作比较方便

作者: cigoo 时间: 2010-11-27 21:04

自己拉根毛细管，加上胶头后，一定要泡酒精消毒后使用。9 u# p5 t# k: b# F9 G4 h) P
不过像你这样的只有用显微操作系统才能保证无菌

作者: nculsa747 时间: 2010-11-27 21:42

看了楼上的回复，我就知道各位并没有亲自做过.其实用2.5微升的枪完全可以做到，而拉毛细管并非如此简单，当然了显微操作系统很好，就是贵了一点。

作者: nobelmao 时间: 2010-12-11 11:28

回复 nculsa747 的帖子2 t5 N. |( A+ e# v7 d. \
" B4 ?, q4 j4 ]
。。。。。。。。这帖子发的

作者: crystal 时间: 2010-12-11 22:40

我一到膜片钳实验室去，我同学就要我要不停的对我嘘嘘，她说轻点声音，不然细胞会掉下来的！
所以等我做的时候，打算半夜三更去做，不用担心有外界因素干扰！

作者: qgjin 时间: 2010-12-12 01:18

本帖最后由 qgjin 于 2010-12-12 02:23 编辑

与卵子，受精卵，早期胚胎的收集差不多。常用的方法如下:
1：取玻璃毛细管（取血样的那种细的-未被肝素处理的）
2：酒精灯下，火焰消毒（但不要太长，否者毛细管会弯曲-只要你不觉得不方便弯了可以）2 J4 H3 S# F8 @% I; \7 X6 h$ w. b  A% c7 l# `
3：待凉以后，一头用手一头用镊子夹住，在火焰（顶端）下烤靠近镊子部分，烤到柔软为止;# q, L5 U  d, m) D
4:  立即在火焰外用力一拉（越快尖端越细，反着相反）, x& Q8 ^. @/ K+ n: [; Q: L$ f3 g
5：根据自己需要，在拉细的部分划个印（玻璃吸管或玻璃刀等均可以），掰断；
6：在解剖显微镜下观察，内径是否符合自己要求（稍大一点比较好，下一个步骤会使内径变小）
7：毛细管尖端需在酒精灯的火焰根部（蓝色火焰部分）烧（1-2秒？久了会被封口的）一下（关键步骤），使尖端的棱角部分钝化；
8：按 1ml(200ul也可以）枪头——胶管（内径能套住下面过滤器的进口，7-8cm）—0.45um过滤器——胶管（内径能套住过滤器出口，40-50cm 自己怎么方便怎么来）——200ul枪头（内塞1ml注射器里推进器前段黑色部分）——毛细管的顺序制作' n7 G) m. b; \' L
初学者（或捡大量的卵或细胞）也可以用巴氏吸管（最后的200ul枪头换成 1ml枪头）代替毛细管，刚开始不太好做，练两下就差不多了。
以上操作做胚胎的都懂就是不愿意写，让我滔滔不绝一顿承让了！

作者: 张也行 时间: 2010-12-12 01:40

你要做单细胞是吗？那为什么不消化呢？短时间不会影响很大的吧。
你真的有必要分析每个细胞的差异吗？几个相同的细胞一起裂解做RT-qPCR不可以吗？只是增加体系而已呀
楼上说膜片钳很高级啊，只听说过，能否发帖给我们介绍一下，奖励大大的啊！呵呵

作者: 张也行 时间: 2010-12-12 01:44

当然实在是需要机械分离单个的细胞话就拉一个针吧，别太长，容易断。别太粗，不然分不开的。

作者: wxiouno4 时间: 2011-5-20 17:10

用显微镜啊,个人觉得难度大了点,听各位高人讲解

作者: 宗介 时间: 2011-5-21 00:29

拉一根glass pipette就行了很简单的

作者: zhangyan813 时间: 2011-5-23 09:10

我们实验室也在做，用的是口吸管，就是一端用做显微操作的毛细管在酒精灯下拉成更细的毛细管，另一端用灭菌的200ul的枪头含在嘴里，中间用乳胶管和滤器连接。这个刚开始的时候有点难，就是控制不了力度，但是等你完全掌握了之后就会觉得可以随心所欲，很好用的，建议你试试。

作者: afei198520 时间: 2011-5-23 09:26

其实只要实验室有膜片钳系统的话，取单细胞就非常容易了。
一般拉制一根5MΩ左右的电极开口就刚好一个单细胞大小，在显微镜下接近细胞，* s$ l ^9 D" W, C6 t7 y8 [2 I* a
轻轻一吸就能将细胞吸入到电极内，然后将电极通过软管跟注射器连接一下，
将细胞打到灭菌EP管内就行，即方便也可以保持无菌，推荐！

作者: afei198520 时间: 2011-5-23 09:30

回复张也行的帖子
) ^8 n5 o) @! y9 h/ | ~, W0 ^
膜片钳主要是进行一些离子通道的研究，推荐看看刘振伟的《实用膜片钳技术》，写的比较通俗易懂，对于了解膜片钳或者入门非常有用。

作者: jane1lee 时间: 2011-5-23 10:15

用口吸管很方便的啊~~

作者: 张也行 时间: 2011-5-23 12:14

回复 afei198520 的帖子

好的谢谢你！

作者: SCNT 时间: 2011-5-23 12:25

可以用显微操作系统非常精确，但成本比较高，最简单的方法你用胚胎操作玻璃针，非常简单方便

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