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标题: microRNA的实验问题 [打印本页]

作者: mckf111 时间: 2010-12-8 20:42 标题: microRNA的实验问题

我是个刚入门的研究生方向是miR-200c和EMT的研究想向各位请教一些实验问题还望不吝赐教. I# n+ i: o9 I3 b
我想研究200c的上调和下调对细胞运动的影响但我还不完全清楚有哪些实验方法能够做到这些我目前知道的是上调可以用mimics 下调可以用拮抗剂但这些让公司合成好像蛮贵而且转染细胞好像是瞬时的不知道大家有没有好的建议可以用构建质粒的方法既能节省财力又能稳转呢？谢谢（好像看到文献上有用pre-miRNA上调和LNA下调，不知道具体的方法是怎么样的，真希望有个protocol啊。。。）! v1 x9 Z# T' z/ f) T; _, v7 f
谢谢！

作者: mckf111 时间: 2010-12-9 10:07

杯具

作者: 华侃天下 时间: 2010-12-9 12:51

顶dddddd

作者: siyue13 时间: 2010-12-15 21:17

帮顶，楼下解答

作者: runsong 时间: 2011-4-12 23:09

miRNA的稳定上调可以慢病毒，可稳转，持续表达miRNA。但慢病毒的包装是门学问，实验室没有基础的话还是挺难的。- }3 ~; j. x( K5 L
一些普通的质粒（如pEGFP-C1）可以经改造而表达miRNA，可参考我与深海寂寞鱼讨论的帖子 :http://www.stemcell8.cn/thread-32898-1-1.html
也有商品化的专门表达miRNA的质粒。可见附件。
( K( D5 @0 o9 Y* O
miRNA的稳定下调可以参考这个帖子： http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010224172205758.htm  与 http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010223153031723.htm
这里面主要是两种方法：1、miRNA海绵（见附件）& O' S7 `4 C' V+ @3 h; `8 u# j7 r
                                    2、miArrest （http://www.fulengen.com/product/mirna/inhibitor/）
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5 N5 v$ R( o7 t! o7 N; w. B7 Z9 I
. G) A4 W* I& ~  b

附件: [miRNA海绵] 海绵.pdf (2011-4-12 23:07, 208.89 KB) / 下载次数 1
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjUwMTF8OGU5ZWQzOTl8MTc2ODUxNjIzNHww

作者: runsong 时间: 2011-4-12 23:12

商品化表达载体

附件: [miRNA商品化表达载体] miRNASelect™ pEGP-mmu-mir-34c Expression Vector.PDF (2011-4-12 23:11, 269.36 KB) / 下载次数 7
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjUwMTJ8OTA4OGE2MzR8MTc2ODUxNjIzNHww

作者: tjbone 时间: 2011-4-13 10:42

好好学习天天向上

作者: snokey 时间: 2011-4-13 13:39

本帖最后由 snokey 于 2011-4-13 13:42 编辑 ! p; G, {% m* Z  H) F
$ L- S& |+ W! d5 b1 q  [9 k' D! J, X" b
建议楼主看看有没有别人发过的文章里有你要的载体.有的话,就可以直接发邮件去要.我写过不少邮件去要,一般一半都可以要到.

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