, F9 D8 {4 Q9 ~# K* C7 l0 C2 o, A 2结果5 v& Y# D- C$ p/ P( T
% X* Q3 i1 Q, {3 Q( ] 21各组细胞JAK1、STAT2、ES比例、EPO活性、EOS脱颗粒能力比较见表1。4 j5 V/ @# S- ]; j6 t, g3 L
) ~7 s4 N& y/ W& J# J, p. j 表1各组细胞JAK1、STAT2、ES比例、EPO活性、EOS脱颗粒能力比较（略）6 t3 H& A* I4 p. m# i) S
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与A组比较，1）P＜005；与B组比较，2）P＜005，与C组比较，3）P＜005# K, S1 R% B( ?5 D! \! b
1 m* E# m/ C7 [6 N0 H6 X 图1IL5诱导下CD34 细胞培养至28 d （略） * l) a: _6 s# r5 E2 P * [4 l( d( q: N; \' c! a 图2流式细胞仪检测细胞结果（略）' A# n* q( h+ N' e
5 U4 O0 H8 p/ ^ 22细胞鉴定HE 染色可见在IL5诱导下，CD34 细胞培养至28 d 时已大部为EOS（见图1）。, l! I, k7 o7 A2 {) m
; K6 K( Y# a; c$ p 23流式细胞仪检测细胞脐血干细胞中分离CD34 细胞的纯度可见大部分是CD34 细胞；IL5诱导下CD34 细胞培养至28 d时大部分为CD16-的细胞，见图2。 6 N% K, F" J! x. R3 I- _ m ! ~) ]. Y: r, T' ~& W6 e( R 3讨论 & m m6 r* v3 c# A8 `0 w $ i1 T) h6 J7 p% B% V! \ r 1 J: n5 ?9 f* a" a " C0 ~/ Z" q3 [3 H 随着对哮喘气道炎症骨髓反应机制研究的深入，认识到哮喘发作可能与肺和骨髓之间一种反馈的调节通路有关：哮喘患者体内促使骨髓源性炎细胞干细胞产生的触发物增多，激活骨髓中特定的造血途径，从而使骨髓EOS祖细胞分化反应增强，使EOS产生增多，释放入血后经趋化因子等的作用大量聚集于肺组织，肺组织局部的EOS再释放细胞因子，诱导骨髓源性炎细胞干细胞发生定向分化。这种肺和骨髓之间反馈调节在维持哮喘慢性气道炎症中具有重要作用。因此EOS祖细胞及其分化的调节因子成为哮喘等变态反应性疾病治疗的新靶点〔4，5〕。脐血含有丰富的造血干/祖细胞，借助于体外细胞培养技术，可以进行分化调控的研究。已知有多种细胞因子参与EOS 的生成和趋化,其中以IL5 最为重要。多项研究证实，IL5 能特异性诱导骨髓CD34 造血细胞分化为EOS。研究发现，IL5Rα是EOS 祖细胞的特征性标志物,表达IL5Rα的CD34 造血细胞可能就是EOS 祖细胞〔6〕。我们在体外应用脐血为CD34 造血干细胞来源，应用IL5为诱导因子条件下，成功培养出EOS细胞，经HE染色和流式细胞鉴定结果发现培养28 d后其纯度可以达到872%左右，这说明应用IL5体外刺激CD34 诱导产生EOS是方便可行的。我们的实验同时发现，B组细胞在JAK1、STAT2、ES比例上均较A组有显著性差异，这说明了在IL5刺激下CD34 细胞JAK1和STAT2表达均上调，且在此基础上刺激了CD34 细胞分化成为EOS细胞。C组细胞加入了JAK1抑制剂后JAK1、STAT2、ES比例、EPO活性、EOS脱颗粒能力均有所下降，与B组比较，差异均有显著性差异（P＜005），这显示抑制了JAK1活性后，不但EOS增殖数量有所下降，而且其活性也明显受到了抑制，说明EOS数量和活性上的增加都是通过JAK1途径介导的，从D组的结果上来看，抑制了STAT2活性后，JAK1、STAT2、ES比例、EPO活性、EOS脱颗粒能力也有所下降，与B组比较差异显著（P＜005），这说明STAT2途径也参与介导了EOS数量和活性上的增加，但是其下降的幅度与C组比较，差异也有显著性（P＜005），抑制JAK1，JAK1、STAT2表达及EOS数量和活性下降比较剧烈，而抑制STAT2，JAK1表达没有变化，EOS数量和活性下降比较轻微，这充分说明了，JAK1在信号传导通路上处于STAT2的上游，抑制JAK1对STAT2有连动效应。我们此次的研究说明了JAK1STAT2信号通路在IL5诱导下CD34 细胞分化成EOS过程中起重要作用，而且JAK1STAT2不但介导了EOS数量的增多，还介导了EOS活性的增强。 # g8 S2 N( g' n& x+ ~ o 【参考文献】5 X9 |6 d, I* {8 [0 i
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7 \: _/ @4 B* F5 b+ N" P 5 E' N- |, f6 X; J9 _: z% E( v (编辑 章 木)作者: awen 时间: 2015-7-6 06:47