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标题: 流式做的而细胞周期和调亡 [打印本页]

作者: liujucool 时间: 2010-12-10 10:36 标题: 流式做的而细胞周期和调亡

各位大侠帮忙看看我做的流式图1是实验组图2是对照组刚开始接触看不懂请各位指教总觉俩个结果反了我们实验室没有流式仪找公司做的

作者: leisong12 时间: 2010-12-10 16:48

下面的图是对照，上面的图是可看到sub-G1峰（代表凋亡）的实验图。图总体看还可以，数据看起来也还可以。下图最好也能把G1峰对准200道的地方。周期分析是用的Modfit软件么？用该软件生成的图可能更好看一点。找公司做多少银子一个样？

作者: hanchao 时间: 2010-12-10 17:19

你的实验处理，造成了细胞出现明显的凋亡峰啦~而且促使细胞从G1期向S期转化。恩 G2期没有什么明显变化。但是你的实验组的CV值较高啦，一般来说结果的CV值大于10的话，结果的可信程度会下降。

作者: liujucool 时间: 2010-12-10 18:26

回复 hanchao 的帖子9 \$ J* G- R' S0 d5 U& |( g

30块一个样；对照组数据和实验组数据传反了，太不意思了，讲的能通俗些吗，以前没有接触过流式，跪谢

作者: hanchao 时间: 2010-12-12 21:38

通俗点~~通俗点，就是说，你的图图的横坐标代表你的PI荧光值。纵坐标为细胞数。图C001在200处出现的峰可以认为是你的细胞内染色体条数也就是n 或者为停留在G1期的细胞数。而400处出现的峰就应该是2n个染色体数也是停留在G2期的细胞数（细胞分裂染色体条数*2）。二个峰中间的部分为S期的细胞数。你的图C001在100位置出现的峰。应该称作凋亡峰（为什么你可以百度）。CV值是可以作为评价机器检测出结果的可信度的一个标准。仅供参考~嘿嘿。

作者: hanchao 时间: 2010-12-12 21:44

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碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。( [$ R: Y- V$ F
碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况

作者: liujucool 时间: 2010-12-12 22:44

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学习了

作者: liujucool 时间: 2010-12-13 00:42

回复 leisong12 的帖子# h( x$ K5 n) l. s% { p9 Q
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师姐问你几个问题，PI好像只能进入死细胞，图中所示不是所有细胞吗；结果的凋亡率怎么得出来的；CV具体什么意思有点罗嗦别见怪呵呵

作者: hanchao 时间: 2010-12-13 11:45

回复 liujucool 的帖子' X3 g4 r4 v6 c- u6 {' V2 H% E
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发生凋亡的细胞核内DNA断裂会产生许多小片段。你的细胞之前是不是要经过70%冰乙醇处理？这步的作用是由于乙醇迅速溶解细胞膜中的脂质，对细胞产生通透作用，即在细胞膜上形成小孔，这就不涉及活细胞死细胞的问题。小孔导致小分子量的DNA片段穿过胞膜至乙醇溶液中而丢失，仅剩下大片段的DNA，最终导致凋亡细胞内DNA含量减少，从而形成一个DNA含量小于2n（G1期峰）的分布区，称为凋亡峰或亚G1峰。那个CV值你不用过分关，。只需要知道检测细胞周期时，小于10的这个标准即可。; ^5 z: _ w7 ^ y4 u

作者: liujucool 时间: 2010-12-13 12:08

回复 hanchao 的帖子$ W( K h# Z/ r
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跪谢师姐那我的实验结果可信度不高了并且实验因素导致细胞大量调亡对吧

作者: future007 时间: 2011-12-15 11:44

本帖最后由 future007 于 2011-12-15 11:45 编辑
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回复 hanchao 的帖子! W' ~+ V# ?8 ?; B7 r8 v$ C4 K/ e

你好，我想问一下，annexin v/PI双染法可不可以用于同时测定细胞周期呀？

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