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标题: 急！急！急！跪求各路高手帮忙！神经细胞莫名其妙死亡？！ [打印本页]

作者: tk1504008 时间: 2010-12-10 19:26 标题: 急！急！急！跪求各路高手帮忙！神经细胞莫名其妙死亡？！

我养的是新生大鼠（24h）的海马神经元，取海马后，剪碎，0.25%胰酶消化20min，含血清培养基终止消化，1000rpm离心10min,弃上清，用无血清培养基+0.2%B27培养，每个皿2ml，24h后全量换液，每隔3天半量换液。
前四天神经细胞球都还长得好好的，第四天半量换液后也好好的，但是过夜培养后，细胞大量死亡，显微镜下观察，有很多碎片，感觉似乎很多细胞都凋亡、裂解了，幸存的细胞体积明显变小，不知道是为什么?
半年后就要毕业了，养不出来细胞，就不能发论文，不能发论文就不能毕业，怎么办啊！！！！
求求各位高手，大神帮帮我吧！！

作者: zb_ming 时间: 2010-12-11 12:58

一般来说，细胞在接种后第二、三天时是死亡高峰期，根据你提供的方法，个人感觉：# i* F) \% E2 ~+ q4 F
1、胰酶消化缩短至10-15分钟，毕竟对细胞伤害不小；
2、也可以用EDTA试试，比较温和，如果消化效果不好，就两者结合，这个用的比较多，相关资料也多；3 v/ H& w5 K. {7 T2 f0 t6 }
3、离心建议1500rpm5分钟，尽量减少细胞损伤时间，离心效果也不错，可以试试；
4、如果细胞第四天死亡还多，建议尽早传代试试，毕竟死亡细胞释放的有害物质也可能伤害细胞。
以上是个人经验，仅供参考！希望楼主顺利毕业！

作者: tk1504008 时间: 2010-12-11 13:21

回复 zb_ming 的帖子

万分感谢！！！！
我马上试试！！

作者: ngu3314 时间: 2011-1-14 07:10

细胞密度是多少？如果密度太高的话当然养不久，密度太低的话也无法正常发育生长。

作者: 禁林秋木 时间: 2011-4-15 09:22

不要用胰酶消化，使用Accutase消化，这种酶被广泛用来消化神经干细胞。对细胞的损伤最小

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