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标题: 关于提质粒的问题，求助！ [打印本页]

作者: crystal 时间: 2010-12-15 12:15 标题: 关于提质粒的问题，求助！

本帖最后由 crystal 于 2010-12-15 12:16 编辑

试剂盒OMEGA的，去类毒素中提！
昨天没能提出来，很郁闷，也不知道是那步没对！
没提的时候每个人都说非常简单，所以我也就认为一定很简单，照着说明书一步步来就行！
可最后没能提出来，有老师说我第7步出错，正因为大家都说简单，所以做的时候没记笔记，到最后做昏了自己都想不起来了！
下次一定要把笔记做好！非常重要！, l9 I8 G) C/ x7 a8 e' i; ^
不知道有没有用过这个盒子，分享下经验！

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作者: daviddow 时间: 2010-12-15 15:42

你在转化的细菌中，最好先挑5个细菌，小提。如果有你的需要的质粒，然后再摇菌，大提。

作者: kostarcell 时间: 2010-12-15 15:50

楼上说的没错，小提你鉴定对了，再大提，记得把小提剩下的菌液放到4度环境，鉴定正确的就直接摇菌，省的转化了。你这种提问的方法不知道你是说自己操作有问题，还是说试剂盒使有问题。

作者: cony 时间: 2010-12-15 20:29

如果菌液经鉴定是正确的话，那么在裂解那一步要注意，液体变清才进行下一步。

作者: siyue13 时间: 2010-12-15 20:52

C萨满，先做小抽呀% e5 Y' |8 U& p$ H, v/ {
常识好吧3 M% b4 m+ U/ O( a
我妈问候你了

作者: sannia 时间: 2010-12-15 21:00

我前段时间用 Qiagen的大提也是，总是没有pellet。最后我在异丙醇沉淀那一步用过夜就有沉淀了，还有溶液2和3的时候晃动的稍微剧烈一点。

作者: crystal 时间: 2010-12-15 21:28

谢谢大家！

作者: siyue13 时间: 2010-12-15 21:36

QIAGEN的大抽要靠重力往下滴，如果拷贝数低的话是痛苦的，除非有真空泵。不过貌似新的改进过了。大抽还是天根和MN的好用

作者: 鹤顶宏 时间: 2010-12-15 22:36

回复 siyue13 的帖子$ H6 V c: `, s5 q: C& X- p

可以利用离心机，将柱子放在50ml的离心管直接离心就可以了

作者: l123w456x789 时间: 2010-12-18 23:22

最后溶解少一些一般说明书要求溶解的体系比较大你少溶解一些但也要把沉淀全洗下来泡个电泳试试看

作者: weiyepan 时间: 2010-12-20 08:04

我们实验室也有用这个kit，感觉还可以，没什么问题。
如果不是wash buffer没加乙醇的话，楼主就要从培养那里找原因了

作者: huangcong1988 时间: 2011-12-12 19:57

这是omega中提的吧？

作者: huangcong1988 时间: 2011-12-12 19:58

很熟悉啊，不过我一般都不用这个，这个用起来很麻烦，而且浓度不能很好的保证，操作起来也不方便，建议小提，一个样提5~6个就行了，稳定性好，而且浓度高

作者: huangcong1988 时间: 2011-12-12 19:59

很熟悉啊，不过我一般都不用这个，这个用起来很麻烦，而且浓度不能很好的保证，操作起来也不方便，建议小提，一个样提5~6个就行了，稳定性好，而且浓度高

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