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标题:
茜素红染色
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作者:
Sophia
时间:
2010-12-15 15:53
标题:
茜素红染色
昨天做了一下成骨诱导后的茜素红染色，竟然一点都没染上！大家帮忙讨论一下是什么原因呢？
* d+ Q, D' N; n V
我是这样做的：PBS冲洗两遍后，4%多聚甲醛固定10分钟，再PBS冲洗两遍，加入茜素红染液，37度孵育30分钟，PBS冲洗两遍，显微镜下观察，没有见到染色，后来有同学建议我再加入茜素红过夜，第二天再看，但还是没有染色！
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我是成骨诱导21天后染的。我的染色过程有问题吗？
作者:
regene
时间:
2010-12-15 17:40
把你的茜素红溶液配方贴出来，还有你细胞成骨诱导后的图片，诱导21天的话，不染色也能看到钙沉淀，且肉眼可见。
作者:
illidancui
时间:
2010-12-15 17:49
我也染不上，纠结。
{- }! ]- u; P
茜素红配制2g溶于100ml三蒸水。调ph至4.5
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protocol上写着最多染30min就行了。不知道为什么染不上。
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成骨细胞我也染过，也没染上，应该不是细胞问题。
作者:
Sophia
时间:
2010-12-15 18:18
茜素红溶液配方：1g左右的Ttis-base,加入100ml三蒸水调PH至8，在加入0.1g茜素红粉剂，混匀，用前过滤。照片我目前还没有拷下来，不过在显微镜下看到表明有一层不只是什么东西，别人说着不像是钙化结节，不知是什么？
作者:
小熊不杀生
时间:
2010-12-15 19:26
茜素红以浓度为1mg/ml溶于100mlTris-HCL溶液，并调PH值为8.3，我觉得你还应该在查查你的成骨诱导培养基，有没有问题？成骨诱导培养是可以看到非常明显的聚集样生长的，而且有黑色钙沉积
作者:
上海过客
时间:
2010-12-15 19:43
小鼠 的 成骨 是不是应该很快 ？ 胚胎发育 只有18天，应该有骨细胞形成了吧？ 体外诱导21天，时间太长了啊？
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作者:
lipd09@mails
时间:
2010-12-15 19:46
你用的是茜素红-S吗？染细胞的和染组织的茜素红不一样吧，染细胞的应该用茜素红-S吧，我也打算做茜素红染色，也在纠结中！！
作者:
regene
时间:
2010-12-15 19:48
先配0.05M的Tris-HCl，调PH至8.2，4度保存。用前再用其配制0.1%的茜素红（现用先配），过滤，37度染色30min。未染色的钙结节在显微镜下是黑色的，比较明显～
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 22:58
可能还是诱导没成骨吧,觉得配方还可以
作者:
nightvsday
时间:
2011-4-25 09:20
我也没染出来。。。
作者:
stylelife
时间:
2011-5-30 20:04
明天我也要染，到时看效果，大家交流
作者:
luoziwei
时间:
2011-5-30 22:10
PBS冲洗再固定？可能你的细胞都被冲掉了。pH有人说接近8比较好，但也有人说接近4.1比较好，我也不知道确切的。顺便在这里请教坛友
作者:
luoziwei
时间:
2011-5-30 22:10
PBS冲洗再固定？可能你的细胞都被冲掉了。pH有人说接近8比较好，但也有人说接近4.1比较好，我也不知道确切的。顺便在这里请教坛友
作者:
amber
时间:
2011-6-14 14:00
是不是因为还没有形成钙结节啊。。我做的成骨细胞原代，现在已经一个月了吧，看着才有点钙化。。你做钙结节之前有没有做碱性磷酸酶的染色？
作者:
gact
时间:
2011-8-17 13:29
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regene
的帖子
; T4 f9 {5 c, g' i, |
' d. w0 ^& e; }. q
是茜素红-S？？
, ~. p0 ]: f, K) U$ M9 j7 N& s
还是茜素红？？
/ D' k$ n* q5 j2 X
作者:
gact
时间:
2011-8-17 13:29
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regene
的帖子
6 H# c# ^! a) t% f6 q/ \- A5 a
/ ]" m3 }/ m: m. J$ |* E
是茜素红-S？？
' X! q Q/ S" t% _0 n/ K( w5 m! ~
还是茜素红？？
% q1 e+ s# |# Z; P, s# I% @
作者:
zxdlala
时间:
2012-3-6 22:48
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luoziwei
的帖子
5 K! X# u1 K/ o, W8 T, I
- e: ?6 u5 g2 D& ~1 i; l7 G
我觉得应该是8啊，钙化结节里面碱性磷酸酶是阳性的
作者:
小猪快跑
时间:
2012-8-15 13:45
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小熊不杀生
的帖子
* N* m/ Y- Q9 ~$ K! x
3 M8 t: Z4 ]4 L4 P2 n
麻烦问一下，成骨诱导多少天就能看见细胞聚集和黑色的钙结节啊？还有黑色的钙结节长成什么样子啊？有没有图片参观一下啊？
作者:
jinggyf
时间:
2013-11-14 21:30
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sydfxt
的帖子
( U: }1 E- e2 J. w
( a3 Z7 V. x6 ]9 Z: }
请问一下，诱导没有成骨的原因有哪些呢？我用的是贝塔甘油磷酸钠、VC称量后放入离心管中，加入培养基溶解，过滤除菌，后再加入地塞米松和血清。
# H' b' A# r; m0 z) X; D
浓度分别为贝塔甘油磷酸钠10mM,VC 20mg/ml，地米10的-7mol/L，10%FBS
作者:
细胞海洋
时间:
2013-11-16 11:08
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jinggyf
的帖子
+ E5 O( G" a3 w p% m/ s
# t2 M. G; k+ _/ G( z4 f7 F( C
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作者:
chichao0000
时间:
2013-12-12 07:41
我认为是诱导的时间不够，形成钙结节后才能染出阳性结果，我做的大鼠脂肪干细胞诱导35天左右，有阳性结节出现，不是非常多。
作者:
chichao0000
时间:
2013-12-19 03:46
最近看到一篇文献上的成骨诱导，茜素红染色图，感觉和自己做的差距很大（这个图染的非常明显，而且时间短），不知各位战友有获得和这篇文献报道相似的图吗？
图片附件:
osteogenic_img-001.jpg
(2013-12-19 03:46, 626.27 KB) / 下载次数 286
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NTc3NzJ8MGY4NjUwODl8MTc5MDg1OTI4Mnww
作者:
细胞海洋
时间:
2013-12-19 08:25
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chichao0000
的帖子
! J: t( l5 y+ G0 o$ h( ~5 w
6 ? ?' o" k) b6 b
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