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标题: 乳腺癌细胞原代培养 [打印本页]

作者: fxy805 时间: 2011-1-3 22:39 标题: 乳腺癌细胞原代培养

最近，一直在养乳腺癌原代细胞，可是发现细胞增殖速度很慢，不知道是什么原因。6 u4 R) V( l; O* ?% i
培养条件是：DMEM-F12,10ng/mlEGF和10ng/mlFGF,2%B27。期间因为细胞生长缓慢试过含10%血清的培养基，效果也不好。不知有人知道问题的症结在哪不，不胜感激！！

作者: 深海寂寞鱼 时间: 2011-1-4 22:49

to fxy805:

从你的培养基来看，你可能是想从乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞，形成肿瘤球。

如果是这样的话，乳腺癌原代培养确实长的比较慢。尤其是前几代，两周多能传一次代都算不错了。

如果你希望它能长的快点，有几方面可以考虑：
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1. 稍微提高EGF和bFGF的浓度至20ng/ml，或者每三天加入适量的EGF和bFGF。  ^; P4 d; B! p8 w3 J2 n& f3 ^, w6 D
! O9 d' s3 M2 M* Z0 X0 [) [/ C* O/ E
2. 保持足够的细胞密度，细胞密度过低也会使原代细胞生长缓慢。7 y* Z/ ?8 g% b+ x' S

3. 原代取材至培养的过程中，注意保持细胞的活性。（比如：保持低温，尽快培养，适度消化，等等）! C% I( @$ i" b0 u

以上仅是个人经验，你可以试试看，有问题可以再交流。
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还有，我不是太明白你为什么要尝试加入10%血清？因为这样会使细胞贴壁，并诱导分化。4 e- m8 X8 U9 B' ]  K4 J
4 m3 c4 s: h* Q8 v  n
也就失去了你最初的意义。1 \2 ^' T. K9 j2 I4 N! C
- Q% g, d8 R/ V4 g1 ^0 L$ `! ]
不知道你有什么想法？

作者: fxy805 时间: 2011-1-5 17:20

谢谢！！！
当初选择使用血清是为了使细胞扩增，结果发现效果不佳。2 R9 [. c1 t( h' B& u; p9 m$ g
现在还在摸索条件。( p+ u( t/ j1 l" H6 g& x4 n
不知道你的QQ号是多少，还有问题请教啊！！！

作者: 深海寂寞鱼 时间: 2011-1-5 22:09

不知道海洋版主是什么意见？
如果海洋不反对的话，我可以把QQ号码给你。。; s7 `) S0 \9 g3 `% V' K0 c* G
其实在这里交流可以让更多的人看到，大家集思广益可能对你更有帮助。

作者: 细胞海洋 时间: 2011-1-6 08:28

回复深海寂寞鱼的帖子0 U& S7 }. F' w. v& d

不建议公开自己qq号码1 p' t' p( Q% y( n( X$ @' E

有问题在论坛讨论更多人可以看到也可以帮助更多的人& J- ]5 V, X: F. k
% {* @0 P' H, V- }. u! W
另外公开自己的联系方式很容易被不相关专业的人员骚扰

作者: zjkenan 时间: 2011-1-6 17:38

我最近在养乳腺癌的原代，长得好慢好慢啊，我是12月9号做的，现在还没长满呢，我是用的1640和胎牛血清，是不是因为我用的是1640呢，所以细胞长的慢

作者: yezi_830823 时间: 2011-1-6 19:49

如果是原代培养的细胞，是长的比较慢但是长起来以后就快了。如果细胞一直长的很慢建议你在培养基里加一些ITS，不要加血清。祝实验顺利

作者: luoziwei 时间: 2011-1-6 20:05

回复 zjkenan 的帖子
! e& O u" Z- G8 o
1640培养基很好的呀，我们实验室就用这个来做癌细胞的

作者: zjkenan 时间: 2011-1-10 13:22

回复 luoziwei 的帖子# Q: t0 a8 N" c0 a$ ~
7 N: E: s) O/ `6 i W, x) b# E
哎
我现在得了3T3恐惧症了
老板让挑克隆到3T3上3 x5 G/ ^/ G; j, v0 |# ^: R
后来那个细胞就长得飞快
我总觉得那个不是癌细胞
怎么看怎么像3T3
可是我的3T3已经用丝裂霉素10ug/ml处理了3小时了( _( p1 {! ~) M% f
郁闷啊

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