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标题: 关于双荧光素酶报告基因检测 [打印本页]

作者: huahua2008 时间: 2011-1-8 20:39 标题: 关于双荧光素酶报告基因检测

将一启动子连到pGL3-basic上，转染肌源干细胞，检测启动子的活性，目的质粒和内参质粒的质量比是50:1，前段时间做的时候，活性很强，最近不知哪出问题了，活性特别低，做法都相同，但现在萤火虫荧光素酶的值总是比海参的低，请各位大虾多多赐教！

作者: siyue13 时间: 2011-1-8 22:28

不懂，帮顶

作者: daviddow 时间: 2011-1-9 09:36

质粒可能丢失了。是不是培养基没用筛选试剂？再转染一下吧。建议筛选单克隆

作者: frank110 时间: 2011-1-10 13:38

如果出现这种情况，你能保证试剂、质粒转染的剂量、方法、检测的条件都没问题的话，问题就出现在你转的质粒的质量上，建议质粒重新提取，再做一次转染

作者: janeyu 时间: 2011-1-10 14:55

一般内参测得的数值会很高，如果你的内参测得的数很低，那说明你的pRL的质粒有问题，需要重新提取，如果是luc的荧光值很低的话那就是你接上去的启动子没有被启动，luc未被表达，可以检测下你构建的质粒的质量。

作者: huahua2008 时间: 2011-1-11 21:59

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请问内参能够代表转染效率吗？如果内参能够达到4、5万，能够说明转染效率很高吗？

作者: janeyu 时间: 2011-1-13 13:30

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如果内参质粒pRL没有问题的话，内参的值可以反映转染的效率的情况，内参只有4、5万，算是比较小的，我们用十几纳克pRL做转染的内参测到的数值一般都是几十万到几百万的。

作者: 布布vs果果 时间: 2012-6-28 11:21

内参转50ng，测得值只有几万，萤火虫荧光素酶的值在几十万。还能继续增加内参的量吗？

作者: webber43 时间: 2012-6-28 11:45

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您好！你说的内参pRL质粒是什么哦？为什么那个需要数值很高才行啊？

作者: 风雪叶杰 时间: 2012-6-29 19:26

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PRL质粒一般都是一个表达量很高的内参荧光质粒，现在一般是renilla。因为启动子是强启动子，所以表达量一般都很高。如果内参的表达都低了，实验的结果就值得怀疑了

作者: 细胞海洋 时间: 2012-7-1 00:15

回复布布vs果果的帖子+ J+ B- R: A! m3 }: m8 W; n

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样

否则他会看不到

作者: weiyepan 时间: 2012-7-10 03:17

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同一个批次的试剂盒么？ffLuc的活性本来就Rluc活性低一个数量级的。。。

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