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标题: 大家好，希望大家帮忙！最近用病毒做iPS细胞诱导，发现AP染色后的图片是这样 [打印本页]

作者: Helena110 时间: 2011-1-10 22:28 标题: 大家好，希望大家帮忙！最近用病毒做iPS细胞诱导，发现AP染色后的图片是这样

本帖最后由细胞海洋于 2011-1-10 22:38 编辑

最近用病毒做iPS细胞诱导，发现AP染色后的图片是这样:'( （如图1)：请大家帮忙分析一下是怎么回事？谢谢！% A3 q' e: M/ D& B# u4 y
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作者: hylok 时间: 2011-1-11 06:47

细胞很生气，后果很严重，哈哈，开个玩笑！

作者: hcluo 时间: 2011-1-11 11:05

AP染色后怎么是黑色的啊，应该显示红色才对啊。你的图片做处理了吗？对了，你有没有做阳性对照啊，我们实验室以前用ES做阳性对照，效果还行。另外，检测和检查一下试剂盒有没有问题。

作者: panyanfei 时间: 2011-1-11 17:18

黑白照片？

作者: ghfvcat 时间: 2011-1-11 19:32

这样的细胞，以前我用蛋白做人iPS的时候遇到过，生长呈克隆状，但是细胞根本不像干细胞，生长得也很慢，还老是往外爬一些纤维状细胞，AP染色呈阳性，但基本无法扩大培养鉴定，推测是复性的蛋白活性不够导致的重编不完全？也没啥好办法，后来[attach]20259[/attach][attach]20259[/attach][attach]20258[/attach]就放弃了，改用病毒了，给你看看我的图片

作者: ghfvcat 时间: 2011-1-11 19:41

你第二张图看上去还有点像的说，没染色的照片呢？

作者: Helena110 时间: 2011-1-11 22:14

回复 hcluo 的帖子+ y6 o5 I3 g! x- a @
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对照组的图片就是所发图片周围的细胞一样，没有大的被染色的区域。核小被染色，细胞不被染色。我用的碧云天的AP染色液，染出来是蓝色的。拍出来不知道怎么就接近黑色了。

作者: Helena110 时间: 2011-1-11 22:21

[attach]20266[/attach]

作者: Helena110 时间: 2011-1-11 22:25

回复 ghfvcat 的帖子

我拍出来的细胞图片不知道为什么大多数都是这样，feeder感觉比你的图片2差好多，不知道是培养液的问题还是什么别的问题。培养液用的DMEM高糖，不含丙酮酸钠，加lif的，加Gln，P-S，NEM，2-巯基乙醇。请指教下，非常感谢啊。

作者: hcluo 时间: 2011-1-11 22:41

如果觉得AP不是很好，建议做一做免疫荧光或者RT-PCR的标志物，以此来检测IPS的效果。

作者: ghfvcat 时间: 2011-1-13 19:26

回复 Helena110 的帖子. V! B& y$ ^8 ~
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我培养的是人的，小鼠的倒是没有培养过，至于feeder,我这是已经传过代的，Feeder是新鲜的，诱导一段时间后当然不可能还有这么健康

作者: mmssyyee 时间: 2011-1-13 20:55

感觉就是像照出来的黑白照片。。。我们AP染液都是自己配的染出来是红色的。。。

作者: Helena110 时间: 2011-1-14 00:04

回复 ghfvcat 的帖子
& b! B$ c2 {9 @5 Q6 L( [7 ]
非常感谢

作者: Helena110 时间: 2011-1-14 00:04

非常感谢大家

作者: gact 时间: 2012-8-29 19:02

回复 hcluo 的帖子4 e( v1 K" p! T! O$ E7 h

碧云天的kit是黄色的。
你们实验室用什么kit?

作者: Jonathan 时间: 2012-8-30 10:38

这些图片看起来不是ips

作者: hcluo 时间: 2012-8-30 15:57

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millipore的试剂盒kit，细胞状态好，应该是偏紫红色的，但这个一般是像ES一样的集落才能做到。如果是单个的细胞，一般是黄色到红色之间都可能会有吧。

作者: franklinhg 时间: 2012-9-4 17:10

回复 hcluo 的帖子

用其他的ALP试剂盒染色可以吗？比如染MSC分化成骨的kit？高手指导一下。

作者: Helena110 时间: 2012-9-10 12:37

还在尝试谢谢大家了

作者: fjnuxp 时间: 2012-9-17 14:32

你应该将显微镜拍照转换到RGB通道而不是你拍的W/B通道，简单地说，你是在黑白通道下拍的才会这样。。。

作者: haijing12585 时间: 2012-9-19 09:10

继续传代，多传传就好了。

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