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标题: SP分选的细节问题 [打印本页]

作者: avril77777 时间: 2011-1-12 22:23 标题: SP分选的细节问题

请教做过SP分选的同仁，添加PI后需要染色多长时间再上机检测？谢谢~~~

作者: Girlmet_FISH 时间: 2011-1-13 12:19

本帖最后由细胞海洋于 2011-1-13 12:39 编辑 ' m2 X5 v3 t/ u" F+ }
# P. S& }, i+ o$ n
一般情况下做SP分选是不需要染PI的，如果一定要区分死活细胞，可以通过流式的前向和侧向散色光来区分，或者用脉冲宽度信号或面积信号均可区分，并且可以区分粘连细胞。如果非要染上PI，一般染20-30分钟左右即可。 A+ U/ S! G$ {1 n7 m8 G
! M# M1 B+ r6 t2 ]' \3 T7 ]' X
sp染色和分选中，对于分选的成功与否，最关键的问题是四点：* d ~. L( }+ ?- x, Z; m0 k. k
1，染色时的温度，保持在37度水浴；
2，染色时间：90分钟左右；! N6 r( h% ?4 D- {
3，Hoechst33342的浓度：50ug/l；! H$ ^4 V/ g' D
4，染色均匀，要时常振荡，使细胞能充分染色。
此外，需加一管加verapamil，50umol/ml的做对照管。

作者: shewawa 时间: 2011-1-13 17:47

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FACs时候的PI染15min就够了。不知sp是side population吗？就是传说中的Aria,一选就是1天的那台机器吗？那个没做过，只看过……

作者: avril77777 时间: 2011-1-16 23:34

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9 K. } n4 ?; x1 V
请问，您做出那种经典的“拖尾”的图形来了吗？

作者: avril77777 时间: 2011-1-16 23:36

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恩，就是side population。请问，你看到做出来过经典的“拖尾”图了吗？9 ?' h! g- e% q T; o

作者: Girlmet_FISH 时间: 2011-1-18 11:46

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我们这做得很多，现在干细胞也是热门，经典的“拖尾”就是弱染侧群嘛，有很多图都是很漂亮的，这一般跟染色有关系，不同的细胞染色的Hoechst33342的浓度不一样，一般得摸一个实验条件，做个浓度梯度！再就是跟染色过程中的是否染色均匀也有很多的关系。我们用的是目前全球据说是最顶级的分选流式细胞仪，型号是MoFlO XDP

作者: avril77777 时间: 2011-1-20 22:20

回复 Girlmet_FISH 的帖子/ U1 R- L6 Z$ ^& @( ^& N
. t2 M; v. T V% }/ d2 c/ {( j
我看到有文献用罗丹明代替HO33342染料的，请问，你们那有这么做的吗？结果怎么样？

作者: Girlmet_FISH 时间: 2011-1-21 09:39

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罗丹明不是DNA染料吧？有报道罗丹明B以沟槽方式与单双链DNA相作用，但随DNA的浓度增加，发射能量减弱，如果做SP不合适吧？不就都成了弱染了。。。我们这没用过，你能否把这方面报道的文献发一份给我：rd6-sysucc@qq.com
多谢！

作者: shandazlj 时间: 2011-12-27 22:14

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) K! q6 G3 W! A3 |5 D
请问你们实验室在哪儿？对外做分选吗？我是山东济南的。想做sp分选。但是这儿没有可供分选的流式细胞仪。想打听一下，哪儿的实验室对外做sp分选？

作者: Girlmet_FISH 时间: 2012-2-14 01:51

回复 shandazlj 的帖子2 P8 t- `2 r; L6 O7 H( H/ ~7 S |
" A) h2 F8 S) N/ O! i
广州。。。貌似不是一般的远。。

作者: ying 时间: 2012-2-27 19:23

PI在Hochest染好之后，上机之前现加都可以吧似乎～不过我没试过，我们平台老师说的～

作者: xubq2011 时间: 2012-7-5 22:43

我们是上机前五分钟加PI

作者: 小婉在此 时间: 2014-3-27 09:54

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我做的分选一直得不到标准的图啊

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