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标题: 求台盼蓝染色照片 [打印本页]
作者: sand503    时间: 2011-1-18 12:22     标题: 求台盼蓝染色照片

  请问台盼蓝浓度多少染色合适
' R: n7 q& A8 _% E, w再求个染色的照片，最好能标注死细胞，讲解下什么算死的，那种很难判断的算不算？谢谢！
作者: lh_kitty    时间: 2011-1-18 14:07

回复 sand503 的帖子
* k: R% E( q" N8 A1 \' O% g8 r1 c1 |6 \* t( `' l8 j% b; f: B$ _- ^0 q( |
我们实验室用0.4%的，染液与细胞液1:1混匀，镜下计数: M4 O; l4 b6 c0 v+ \
作者: carolshen    时间: 2011-1-18 14:10

回复 sand503 的帖子& [5 E$ a% G# ]. g1 D: Q

0 D8 M; \2 v3 ~5 @* o% z9 D一般不拍照吧，成蓝色的就算死细胞，基本上可以很容易的判断的
" F9 s/ a8 m2 V, Y稀释比例如楼上9 }  U; c$ T* O$ k7 T. i+ A8 }0 S
作者: deron    时间: 2011-1-18 14:17

图和真相来了
2 W' a7 A0 F, c  Q Image2.jpg * E2 n9 e* G- D4 f! A, F' R7 i! z
时间紧迫也没来得及用PS给你标一下染色细胞，不过图上很清楚
2 {2 G8 n1 B- o+ w# n! a, N事实上如果显微镜的光度再强一些，效果更好

图片附件: Image2.jpg (2011-1-18 14:16, 821.93 KB) / 下载次数 210
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjA1NzB8ZTEyMzc1N2J8MTc0ODQzMTU4M3ww

作者: jhu132llh    时间: 2011-1-18 16:17

0.4%的台盼蓝染色. G4 V$ m* }( G( D! Y
关于判断细胞死活的问题
/ v! s9 H* S3 z- K正如上图所示：白的发亮的细胞是活细胞；而被染成蓝色的细胞就是细胞膜破裂的细胞，即为死细胞；6 y7 y; y- p3 [7 n& T
因为台盼蓝只能是死细胞细胞核染色，而活细胞不会摄入台盼蓝的。
作者: tangyvhuang    时间: 2011-1-18 20:35

基本上都是用0.4%的，染液与细胞液1:1混匀，
+ E" O: ^4 @! F0 \9 N5 T8 w2 K死细胞的细胞膜是破裂的，台盼蓝可以进入细胞进入使细胞核着色，这样死细胞就会显示蓝色的，活细胞由于细胞膜完整，所以不着色。
& L+ i9 u; \3 R, I% h不过时间长了的话，活细胞也会成死细胞着色了
作者: xfyang2007123    时间: 2011-1-18 21:44

回复 tangyvhuang 的帖子" u5 e/ x6 Y9 E$ L

! m2 b# h+ A, |3 Y) Q! T: b% a" @! p同意楼上说法。
作者: zxdlala    时间: 2011-1-18 22:05

我还没用台盼蓝，细胞不好看，也不知道是死是活。看来也得买点用用了
作者: inno    时间: 2011-1-19 10:40

那计数是计亮点的细胞还是说包括哪些染成蓝色的死细胞？
作者: sand503    时间: 2011-1-19 11:08

deron 大大，好像光度很亮就感觉他是死的，但是眼睛很不舒服，眼睛舒适的亮度看的话，又看他没有染色。那我应该亮的数还是舒服的亮度数啊？
. c" U( L& F" k/ @
作者: luyoutian    时间: 2011-1-19 12:02

回复 inno 的帖子+ h; D. F2 y1 m2 \/ F; ]

9 W- |+ g( f+ k" g, P' |计数是计圆形亮点的为细胞，死细胞一半不发亮~这个很容易看
0 M# \6 |0 \: P; a$ s$ o计数可以先拍照让然后再计数，但拍照和显微镜下看的细胞还是略有不同的9 E( L4 |% ~4 b- ]# N7 q
建议还是显微镜下计数
作者: aminhair    时间: 2011-1-19 12:04

通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。2.台盼蓝染色
8 p: J" J5 T& a* c" |$ s    吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入台盼蓝染色液100微升，轻轻吹打混匀，3-5分钟(染色时间不宜过长)后滴板计数。  
: I* p& I9 z' i6 p% j3 h2 S% d    3.细胞存活率分析, g- r# z7 O& e
    吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。
' Z4 n' Y( I3 }) R- |) y    细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数X100%。
0 `. `; V' z1 _8 W) T    注意事项
: \. a, J, `& c$ t+ _) R! Q* b    配置时需要滤除菌，取用时最好在超净台内进行，以免微生物污染。    n# h* D2 L) d
    染色试剂具有潜在的致癌性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7 f  O" f# z0 B0 }, C+ a
作者: xuehu20    时间: 2011-1-19 12:36

tangyvhuang 发表于 2011-1-18 20:35
8 d/ H2 e" ^) l0 l  H4 I" g/ [8 N基本上都是用0.4%的，染液与细胞液1:1混匀，
, e( z! b, D# y+ T5 E死细胞的细胞膜是破裂的，台盼蓝可以进入细胞进入使细胞核着色 ...

; Q/ V  V8 t% O7 U# X5 q$ k请问染色后多久观察合适？
! A6 g, _7 n5 q/ ?
作者: xuehu20    时间: 2011-1-19 12:39

回复 inno 的帖子
0 @0 W9 i+ }1 j1 a
, U9 ^7 {: G, l1 ~, x都记，细胞存活率=活细胞数/总细胞数，即图中亮细胞/（亮细胞+染色细胞）
作者: zerollx    时间: 2011-2-17 15:23

回复 lh_kitty 的帖子3 P  L9 e2 l( D
# N: m/ y8 x6 K# X# c$ ?, `
一般染多久后观察呢？
作者: deron    时间: 2011-2-17 16:17

回复 zerollx 的帖子! d, g7 P1 `; V5 X5 Z8 V4 [9 p
6 H( Z* j9 _: w! z( C
说法很多，时间长了以后部分活细胞也会因死亡而被染色。8 C) b) t( t8 S; r# W
我是30s后开始观察——染色速度很快，而且活细胞也不是那么容易挂——5min的时间是可以接受的。
! A& {% \. w7 M) s最好还是拍照观察，既可以保护眼睛，又便于统计保证结果
作者: luyoutian    时间: 2011-2-18 10:41

回复 zerollx 的帖子
6 [8 L% a  [' ]; R0 V$ n
, n4 f6 Q; f6 G$ _" e, Q一般没有要求染色时间，细胞与染色液充分混匀后，即可点样计数
作者: lh_kitty    时间: 2011-2-20 21:14

回复 zerollx 的帖子$ I  V. _) p# Q

4 |% u+ `/ e9 K8 o7 C& O5 R3 Y一般论坛里讲3分钟内观察9 \1 p. {0 C# W
作者: Scarlett    时间: 2011-9-29 15:08

如果有很多细胞碎片会干扰细胞计数，怎么办呢？只看形态进行排除吗？
作者: Tonypan    时间: 2011-10-4 17:15

一般我加上去过不到1min就看，时间长了都变蓝色了
作者: joesiezhao    时间: 2011-10-9 14:40

以我工作经验来说，染色时间没特殊要求，因为等你混匀再点计数板，等细胞沉降下来，这个时间已经够染色了，正常细胞时间稍微长点没有太大影响，复苏细胞必须三分钟内观察完毕，受时间影响非常大，半小时再观察细胞基本死光。



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