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标题: 关于油红O染色 [打印本页]

作者: feiyang 时间: 2011-1-23 09:26 标题: 关于油红O染色

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

作者: glysh 时间: 2011-1-23 19:59

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。6 c& k1 H/ K( E/ y' D3 t$ D: u
第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；* q4 m) e8 f5 k: i
第二，不需要苏木素复染

作者: regene 时间: 2011-1-23 21:30

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。8 u1 i; u3 ~1 c% M d% [
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

作者: luoziwei 时间: 2011-1-23 22:05

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

作者: tangyvhuang 时间: 2011-1-23 22:11

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
脂肪细胞的油滴很明显的
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。) N( B z! L9 z
3，60%乙醇分色，; W# K: Z8 I: E' ~- e/ H
4，苏木晶复染
5，水冲洗至变蓝。8 b' I+ d/ M5 a! |

作者: feiyang 时间: 2011-1-24 07:06

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

作者: glysh 时间: 2011-1-24 09:00

回复 feiyang 的帖子% F- P% O, |, O7 r: V" Y
" F; f' q" q" ^2 Y, O
很有可能是空泡！

作者: 碧海蓝天 时间: 2011-1-24 09:21

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,  D0 n) r8 I& a+ F- k: S- u8 v
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.( A+ s3 s/ x5 u  b
另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,3 H# N9 F( i  Z1 o( h( x1 o
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

作者: feiyang 时间: 2011-1-24 11:45

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

作者: maxiaona 时间: 2011-1-24 17:05

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。! ^$ k0 v8 }3 q: B
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。$ z; f- q j p( i* |
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。

作者: gqs2872022 时间: 2011-1-24 18:09

1.染色的工作液现配现用，不宜久置。
2.建议过滤工作液，能减少杂质使染色变得更好看。
3.染色前需加60%异丙醇5min。% r/ }' `' x: t: }4 n
4.染色时间15~20min。8 y: W; o- m9 c, n
5.水洗，60%异丙醇分色，时间要恰当，不宜过久，过久估计全部都会掉。9 w {- [2 J8 D& l! `/ d4 E
6.苏木素复染可要可不要。

作者: why121 时间: 2011-2-14 14:21

最近也在做这方面的染色根据成品说明书是用4%的多聚甲醛固定30min 然后PBS洗后用3:2稀释的油红染色但本实验室的显微镜不好照的相感觉很差想请教下你们用的是倒置显微镜多少倍还是用一般的光镜呢

作者: zgzjhzxyj 时间: 2011-7-7 11:26

油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液,避光4度保存，用的时候油红O储液：蒸馏水=3：2的稀释。
步骤) {5 P! s5 y$ N' J. L
1、固定：吸弃培养液后加入95%酒精固定30min或以上  K$ x* u& ]( o
2、漂洗:吸弃固定液，PBS漂洗1次
3、染色：加油红O染液染色10-60min
4、漂洗：吸弃染液，PBS漂洗3次，尽量把背景洗干净，避免色素沉着
5、拍照记录
/ Y1 d  H! R. q6 i8 t! y/ R
注意：所有操作都需轻柔，脂肪细胞比较容易破裂，脂滴外溢' b1 `! a. p/ T  N

附图：3 |, D; g; T" o
[attach]29808[/attach]

作者: Learner 时间: 2011-7-7 14:42

回复 zgzjhzxyj 的帖子
. h0 C4 g: x6 U, x2 l0 g! Z
好像一般不用乙醇固定吧！

作者: menghy 时间: 2011-7-7 22:28

我做过几次MSC诱导后的脂肪油红O染色，是需要过滤杂质。基本上都能染出脂滴的，没有经过苏木素复燃。

作者: menghy 时间: 2011-7-7 22:29

我做过几次MSC诱导后的脂肪油红O染色，是需要过滤杂质。基本上都能染出脂滴的，没有经过苏木素复燃。

作者: menghy 时间: 2011-7-7 22:30

我做过几次MSC诱导后的脂肪油红O染色，是需要过滤杂质。基本上都能染出脂滴的，没有经过苏木素复燃。

作者: 琛儿326 时间: 2011-7-7 22:43

回复 glysh 的帖子" @% R# J3 V0 {- a$ X& q
3 |& ]6 z& D) [. u' ?/ T) a* H
如果出现空泡是什么原因呢？

作者: zgzjhzxyj 时间: 2011-7-8 09:04

回复 Learner 的帖子

一般固定液都选用“10%中性甲醛固定”，尤其是大的组织标本。但在细胞实验中，95%酒精固定效果也很好，既然酒精的固定效果能达到我后续实验的要求，那当然选择酒精啦，毕竟甲醛气味重，对人体毒副作用也大！！！俺们比较怕死

作者: havie 时间: 2011-9-26 20:32

油红染色时，直接使用油红染色，不稀释，可以吗
稀释后的油红，染色时，常会含有渣滓，有时染上了，颜色也较浅，不知是什么原因

作者: meister 时间: 2011-10-9 10:08

油红新鲜配制8 I3 ^9 _4 L" J2 n6 ?
储存液用100%乙醇
工作液用70% 乙醇
不用异丙醇
最好过滤

作者: havie 时间: 2011-10-11 23:00

储存液用乙醇可以吗，我们用的都是异丙醇。。6 X b$ ?6 O2 i! B/ v( y- J

作者: ytumuyangren 时间: 2011-10-19 10:54

10%的中性甲醛换成4%的多聚甲醛固定可以吗？我看到有的人说多聚甲醛对脂肪有影响，不知道是不是，请各位高人指点。

作者: 小精灵 时间: 2011-11-15 15:17

谁能指点下啊，肝脏组织用油红染色的方法啊？我现在在试验着，但油红燃料杂质很多，且染出来的片子看不到脂肪细胞，有一块块的红，但分辨不出来是什么，是脂滴吗？
请高人们指点迷僧啊！谢谢

作者: bianhuimou 时间: 2011-12-6 19:51

回复 glysh 的帖子4 }/ i+ `9 w, v; r7 d& d
9 R2 e3 ~- |* {( l9 p# d
您好，您能传一张成脂诱导分化未染色的图片吗？我诱导了21天可是油红染色总是不能着色，我不知自己的问题在哪？感谢

作者: 不苦的药 时间: 2011-12-6 23:20

回复 bianhuimou 的帖子
% A8 u$ `- j. N. H+ V6 k6 C. f
你做的事什么细胞

作者: daokou006 时间: 2011-12-15 13:02

我做的是大鼠的骨髓间充质干细胞，地塞米松用10*-6mol/l的，干预7天后，油红染色，没有染上，不只是哪的问题？向各位请教

作者: 细胞海洋 时间: 2011-12-15 15:51

回复 daokou006 的帖子. }7 p" q1 r" a$ Y! q
4 D' ? U' D, ]% G& m9 e% @' k
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作者: xulingous 时间: 2013-10-18 19:28

回复 feiyang 的帖子: F- f! L( Z g- Q+ J

这么久的帖了啊。。楼主上个图片看看？

作者: xulingous 时间: 2013-10-18 19:34

回复 daokou006 的帖子
) z5 I% A2 c2 Y' x6 p- i7 J/ A
诱导时间不够吧。。或者Dex浓度可以加大

作者: huangcong1988 时间: 2013-11-13 19:11

回复 xulingous 的帖子

呵呵，这么久的帖子都被你挖出来了，不知道你诱导效果咋样，我感觉我的诱导程序很稳定，而且细胞形态变化也很稳定，但就前两次染色效果还行，之后染色都不行

作者: huangcong1988 时间: 2013-11-13 19:19

回复 xulingous 的帖子" h# Y8 }7 n; ^5 [1 }
: f- L1 d7 x- [. w0 t" S2 U6 C0 W
1,2分别代表之前跟之后染色的图片，均为20x

作者: huangcong1988 时间: 2013-11-13 19:19

回复 xulingous 的帖子6 b6 x/ @ j! u" i4 t+ f/ d

可以看看是什么情况

作者: myylovewp 时间: 2014-4-17 08:48

您好，看了您油红O染色的帖子后，想请教您细胞染色后很多红红的块是什么？您是怎么解决的？希望您能帮助我一下，万分感激！

作者: 细胞海洋 时间: 2014-4-17 08:53

回复 myylovewp 的帖子
! C1 j. u* J" l. ^- ^& u! i
你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样

否则他会看不到

作者: 细胞海洋 时间: 2014-4-17 08:53

回复 myylovewp 的帖子
2 {4 a) @! ]! g' {
建议你发新帖提问$ J. o3 V- j3 i/ l' [, t1 g! M; |" J

作者: myylovewp 时间: 2014-4-17 10:20

回复细胞海洋的帖子

真的很抱歉，初次使用请多多包涵，谢谢版主的提点。

作者: myylovewp 时间: 2014-4-17 10:53

回复 huangcong1988 的帖子) w. N% b; k* s9 M, b
8 K8 F: g6 g: S4 F
我买的GIBCO的诱导分化试剂盒，成骨和成软骨结果很好，诱导成脂肪细胞貌似没观察到油滴（也不知道油滴到底啥样子）。在21d时用油红O染色，具体步骤是PBS洗，4%的多聚甲醛固定30min，水洗，油红工作液染色30min，水洗，观察。结果感觉没洗干净，上边有红黑的东西，貌似在细胞外。然后改进方法，染色后用60%的异丙醇漂洗，再用水清洗，感觉上边飘着黑黑的一层，也没染上颜色。我想请教一下，是我染色出问题了吗？

作者: 黑夜的问候 时间: 2014-12-10 16:53

细胞用中性甲醛固定时需要在4°条件下吗

作者: 细胞海洋 时间: 2014-12-11 09:05

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作者: cyagen 时间: 2014-12-16 10:04

如果没有中性滤纸，可以离心沉淀杂质；第一个固定步骤很重要，我们是用4%的中性甲醛固定30min。

作者: chenchunlei 时间: 2014-12-18 11:56

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用0.22的一次性滤膜可以过滤吗

作者: chenchunlei 时间: 2014-12-18 11:58

回复 glysh 的帖子
. t# k/ i, r# F+ R) W+ e5 I
在换成成脂诱导液第3-5天的时候，发现细胞开始出现漂浮，不知道什么原因

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