问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？( f: F$ S2 H5 l+ T8 x
我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？5 v' o: }9 t0 ^+ G$ f1 w
用雌的还是雄的有区别么？作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-17 14:35
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今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！; k. ]( U! y2 A5 ]
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我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。, c/ T! d' n6 K7 j% S
雌雄我没设对照。。。 5 ]- ~, w# k, _! w1 l6 N }4 P5 @2 v7 }6 A
至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。 }4 M; t" g# Q2 w( S( E" R% s
4 E8 y, N/ o$ C0 yBLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。+ ^" a5 M, X: U1 c
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高 " W$ i/ e( |. U5 O7 x. X% U0 [* ^2 R$ f1 H) c' b
至于注射时机，也很重要。。。5 e. c4 y! I. }2 s5 @- e7 ]! g
成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。 , c7 g2 @6 @$ ^( J# l. { / {4 q# ? M; d. c$ P" { 8 [( j3 \* i9 r( G+ e2 J3 l3 ?6 o, ~+ j+ I. Z5 I+ \* b 作者: ghfvcat 时间: 2011-2-18 16:04
回复 瑟瑟狼 的帖子 * U6 @- u# r; I0 j2 l) g / J. Z$ X1 p' B5 G呵呵，恭喜恭喜， 3 h9 Z) \; `1 \) u2 T还没开始打，心里没啥底。9 g) L4 x/ j( B& e. `
请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-20 18:16
回复 ghfvcat 的帖子 1 X- y$ @1 @' F% r. f% U" s( Z! s2 Z7 z; x; S
建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献% E! V8 r- s4 j$ f0 r
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2 |6 q, F" e" f1 c x我自己的克隆。。。 / o, Z) i7 L; e0 ^ * T/ ^! j- k' i( M* f/ w. g[attach]21749[/attach], h* H! d4 Y8 D
" l" F# `8 C) a* I7 e; [4 U$ m一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。 * z4 P# l8 `3 _$ z+ P8 g ( E7 v1 m3 }; Z: V1 h[attach]21750[/attach] - H4 R( R0 H" ~5 S0 k, h6 e7 e9 X" m$ l: A. Z- z2 q( _
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。/ I# Q7 @4 e& D% ~
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》& X8 u) v O. c- S$ Y. A
[attach]21751[/attach] + v- W M& Z5 _2 H7 V% S 1 s7 H. ^; A5 J2 k6 k文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。 7 L7 v* ]8 N% j6 ~根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；3 X! e# p( w/ X1 ^- Z4 ?
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率； 7 p* Y$ ? s L u" `0 {8 x% M/ h K5 G8 ]- l9 ?4 o9 d5 P
所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。 8 D' K5 N! {. R% t# d4 d! q$ l) @ & z2 ]+ s* c" v: V' J甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-20 18:19