干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 问个问题，人类iPSC做畸胎瘤 [打印本页]

作者: ghfvcat 时间: 2011-2-12 11:42 标题: 问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？
我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？; A. ~. J! A5 y( o2 {0 c
用雌的还是雄的有区别么？

作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-17 14:35

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol
4 _0 J1 ^- m& r
今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！# X! \1 d! R$ J4 x3 o9 }- d2 |

我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。, [' I9 o/ L5 h+ v7 ^
雌雄我没设对照。。。

至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。
* h" x* Z4 c( h% t
BLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。& Y* l P, `6 P" K% S6 U; g
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高6 c& a9 {6 D( z H5 e) W+ }

至于注射时机，也很重要。。。
成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。

/ ?8 g" _6 W( L

作者: ghfvcat 时间: 2011-2-18 16:04

回复瑟瑟狼的帖子# X) Y) i# q5 m: D3 `( u
% R3 l8 Q, Z9 `6 _# [# H- |, p
呵呵，恭喜恭喜，' f7 D' ~: g2 Z, s" V/ k: x! Y
还没开始打，心里没啥底。0 }# }, R* n% t! g9 G0 q
请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-20 18:16

回复 ghfvcat 的帖子3 V- P& W& T9 j* ]: F3 x I

建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
+ O$ n5 j+ b+ \' e( n
[attach]21748[/attach]

我自己的克隆。。。

[attach]21749[/attach]7 D# w0 ~) J @) e% t; {0 C" J! `

一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。& _, E: J) G$ R# d1 z
5 D8 ?" w4 l% l1 Z6 a) _8 @
[attach]21750[/attach]
! p+ b; P$ u, p5 v, I; g9 m% W
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》
[attach]21751[/attach]

文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。/ J0 x, @# W- z4 c/ G
根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；
* t, A$ S# |: \0 F
所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。* M4 ]4 s/ K$ c: K

甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

作者: 瑟瑟狼 时间: 2011-2-20 18:19

回复 ghfvcat 的帖子

忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

作者: zsycgz 时间: 2011-2-20 18:24

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

作者: gact 时间: 2011-2-20 20:26

太给力了。。。这个贴我收藏了。。

作者: ghfvcat 时间: 2011-4-6 19:10

回复瑟瑟狼的帖子4 x7 r& p1 x6 l, {
' H+ h. B4 x1 `
回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，
再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)