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标题: DNA酶切后，不立即电泳，在4℃放一段时间再电泳可以吗？ [打印本页]

作者: sniper 时间: 2011-3-6 19:10 标题: DNA酶切后，不立即电泳，在4℃放一段时间再电泳可以吗？

DNA酶切后，不立即电泳，在4℃放一段时间（2-4天）再电泳可以吗？已经混合好molecular weight buffer 和 loading buffer，哪位大侠指点一下

作者: 千细胞 时间: 2011-3-6 19:38

呵呵，先不说酶切效果怎么样？DNA在4度放置就存在降解等方面的风险，这样的回收片段极其有可能对你后续的片段回收和链接造成影响，而你自己会苦苦郁闷找不到原因。建议还是不要放这久，实在不行，你可以重新酶切撒

作者: sniper 时间: 2011-3-6 19:50

回复千细胞的帖子5 d2 G6 [ z% o: B% w6 O- \
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多谢指教

作者: 张也行 时间: 2011-3-6 21:59

你要是只是鉴定一下质粒什么的，那其实没有问题。4度，各种酶的活性都减弱了。但要是如楼上所说的要回收片段。最好还是立即做。

作者: Chunjieliu 时间: 2011-3-7 07:52

我建议如果酶切之后不立即电泳的话，最好是放在-20℃或-80℃中，这样可以防止DNA被破坏。4℃中虽然酶的活性较低，但是如果长时间放置，对DNA还是会产生一定的影响

作者: fananran2003 时间: 2011-3-7 09:53

放个2-4还是没什么问题的，但是长时间就会导致降解

作者: lcj1988 时间: 2011-3-7 12:18

我也学习了，嘿嘿

作者: sniper 时间: 2011-3-8 10:47

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thanks so much

作者: sniper 时间: 2011-3-8 10:47

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你以前做过吗？

作者: ruochenzu 时间: 2011-3-8 11:05

最好不要这样

作者: ghfvcat 时间: 2011-3-8 14:46

再回收连接的话肯定有问题，4°放一天都有危险。切开的粘性末端是单链状态，还是很容易降解的，粘性末端降解后连接就没那么好连了。只是鉴定可能还好点) i$ x( n$ a! H. U- G7 T1 d
可以冻起来的，-20就行，冻个几天是没问题的，

作者: fananran2003 时间: 2011-3-8 15:46

以前做实验不认真，把质粒用完忘收了，在常温放了近两天后来一跑电泳没啥问题哈，DNA降解相对没有那么厉害，我是根据自己的丑事推测的，哈哈哈

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