干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求Hela细胞成球培养条件 [打印本页]

作者: amosummer    时间: 2011-3-7 11:53     标题: 求Hela细胞成球培养条件

请问Hela细胞可以进行成球培养?是否需要先在普通DMEM培养基里培养一段时间?如果是的话,在细胞达到多少覆盖率可以更换无血清悬浮培养基?希望各位不吝赐教!
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2011-3-7 12:23

to amosummer:5 l3 D* m% H" d) v
+ t* M- s3 {+ Y5 J5 U& j8 k
    请问你看到过哪篇文献里可以把HeLa细胞养成肿瘤球的吗?
/ ^5 Z- m  {4 w" c
! o; d+ E  ~8 Y0 W! |7 C    第一,目前已有的英文文献中似乎还没有提到HeLa细胞可以形成肿瘤球的。只是有文献说HeLa细胞中有侧群细胞,但是没有进行功能验证。
  g2 D! a! _3 E* v
0 S/ B, X$ b) q+ [8 i8 X    第二,HeLa在目前常用的(DMEM/F12 + B27 + EGF  +  bFGF)无血清培养条件下,是不形成肿瘤球的。8 X  U9 t2 g0 ?( `/ U, ]4 r

# T% ~1 y+ Q; o5 [' ^              当然如果你非要想让它形成肿瘤球的话,你可以尝试其它的培养条件。因为我还无法肯定的说,HeLa就根本不能形成肿瘤球。8 I( _2 V6 G/ Y, `+ l
& o% j  B+ M: l) H. b
     第三,如果你希望研究宫颈癌的话,如果你也希望用细胞系进行研究的话,如果也觉得细胞系研究可以证实你的实验假设的话。
# U: k' S  \1 e# v, _: D           
8 T, k  E) H- X- }. R! p               我认为你可以试试看 C-33 A  细胞系,就是通常所说的C33A。它可以很容易的形成非常漂亮的肿瘤球。2 L6 I- V% Z- g
8 R, g; h! H% I6 D
               但有两方面你必须清楚:- i. J( c( C9 F* L; B! t5 Y
; H3 h5 O. e. b/ W' r% x
               1. C33A是鳞癌、腺癌、腺鳞癌?这个问题不太清楚。ATCC没有给出明确的答案。/ M  f. k  b- B9 P  I6 n+ F/ C

' F2 F- Q0 C$ T2 J+ ~- P- I               2. 能形成肿瘤球,未必能实现你的实验假设。风险绝对不小。! W( x, d/ d  g) ?0 s
/ W" ?4 ?6 E8 l7 b
     个人观点,仅供参考。欢迎继续交流。
作者: amosummer    时间: 2011-3-7 13:49

回复 深海寂寞鱼 的帖子; J3 g8 U: q8 d+ [: B- ^
5 ?, N1 Z2 c5 m# }/ i
非常感谢!你的信息对我帮助很大!
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2011-3-7 21:47

回复 amosummer 的帖子% L9 P9 W3 }0 ]5 [( h  n

: i9 \( K* ~; Y! r2 S8 O你太客气了。+ ?, K; q- B5 @5 z/ u
+ I1 Q- C+ _! X, E$ X' e4 r
能提供对你有用的信息,让我也很开心呢。7 M8 d: C2 m" }" l5 Z

5 q+ D* X$ s* a$ t0 x欢迎继续交流。
作者: Rena    时间: 2011-3-15 16:58

回复 深海寂寞鱼 的帖子$ M# n" C# E0 M6 D( S
; H( D: |* o# ^: c  l
你好,请问肝癌细胞株BEL-7402 、HepG2药物富集后可否无血清悬浮球培养,这方面的文献没有看到,麻烦赐教\(^o^)/~
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2011-3-15 22:11

回复 Rena 的帖子
& o; b, ?3 w0 Y% D& X1 H( ^5 e
$ W- B9 |+ k, o& k2 p3 lto Rena:5 [1 Z2 x7 Q. t2 l: q- {- B" r( V

1 l. W% u2 X2 k9 ]    肝癌细胞株BEL-7402 、HepG2确实没有直接经验,不敢给你乱说。
2 K7 S# [2 _; B- W: l3 w0 X
" Q/ O2 j& Q" o9 x2 O    但是Hep3B是可以在无血清培养基里形成肿瘤球。
* M- i! x% X) |$ N: T. M& e4 B
) B* u7 c/ Y- v5 c* Y" M0 \    欢迎继续交流,共同进步。
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2011-3-15 22:11

回复 Rena 的帖子* R" K1 w- ?* C

6 C* L( E( |9 }4 z- G) hto Rena:
, g9 ~4 {# z5 Z6 T3 @
/ Y' q- r2 v9 J4 J" B    肝癌细胞株BEL-7402 、HepG2确实没有直接经验,不敢给你乱说。
+ x5 U$ j/ C1 {
" F& d( {& a. F5 T    但是Hep3B是可以在无血清培养基里形成肿瘤球。
- ?/ {2 ^6 m# v; T/ P; k1 ]7 e
: w; ~* t: A+ k    欢迎继续交流,共同进步。
作者: Rena    时间: 2011-3-18 15:52

回复 深海寂寞鱼 的帖子
5 R! ]" J% E5 d8 X$ h
/ l+ o* E2 o* b% B7 O" ]' V2 K2 o: P) O谢谢,现在实验是采取化疗药物杀伤细胞富集CSC后诱导,结果很不理想,继续探索中。。。再次感谢\(^o^)/~
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2011-3-18 21:36

to Rena:
; r8 f% Q2 a: E( \
% [8 y$ N. r8 ]$ q    个人建议:
4 m$ @' O3 o) {; z' L+ U) e
/ K, V+ n& V( x" ~9 x6 R    1. 首先搞清楚你所用的细胞系本身是否符合干细胞模型,不然无论你做什么都是浮云。; f' m- ~- w: a5 |! q3 H' c) W( g

& g; {" _) u# t      (原因是不是每个细胞系就能拿来做肿瘤干细胞相关实验)
, D1 ]) K  U( B) K3 O6 Z1 V: n/ ?! H- |  H0 p: j& c, p
       尽量多查文献。尽量要有影响因子在5分以上的文献支持。9 p5 A8 o/ m7 U! o

0 v. |9 b( P' _1 m    2.  采用化疗药物富集CSC不失为一个方法,但本身有很多不容易实现的问题。
. `& K9 n, s- D9 J8 k: p
$ u2 s: D" ~0 ]         i.  用哪种化疗药物才能杀死非肿瘤干细胞,而尽量让肿瘤干细胞活下来?
( |& e. p& B* ~( `6 `0 u+ G! {. a* r) p3 z$ n
         ii. 这种药物用多大浓度合适?需要作用多长时间?; {& v* v2 T3 T9 W. b

. o' i/ D5 T3 S" {9 ]$ H8 j0 S9 c$ [' O         iii. 肿瘤细胞经过化疗药物作用后,是否还能保留其parental细胞的特性?
+ B* P: S# k) @7 P8 _$ {
9 B. c) x' |3 S/ s, F         这些问题都是需要你探索的。要么就要有现成的参考文献。
( l  K: ^3 M2 _/ C" V/ N; z' B0 m  c: q, \3 J8 M+ N/ c
祝实验顺利。
作者: lxn90219    时间: 2014-6-5 15:22

回复 深海寂寞鱼 的帖子
3 f: v( y4 ~/ f2 p( k
, [6 r# b7 }) u9 h( M. S$ M我现在也要用hela做,很多文献说能做出来了,到底能不能用 hela 跪求
作者: Tim    时间: 2014-6-5 16:18

回复 amosummer 的帖子
" Q; {2 \+ `' S; w" B% y3 j* Z  Z2 b* F4 B
共同努力吧!我也正在搞粘膜细胞的成球培养!现在细胞是成单个的球体,可见二分裂,但是细胞增殖很慢!正在寻找突破口呢!我用的是我自己配的无血清培养基!
作者: Tim    时间: 2014-6-5 16:20

回复 深海寂寞鱼 的帖子
( [# I. t) B6 R/ J8 D4 `4 F5 W& A3 e$ u. |# Q  J& i
C33A培养基的基本成分你知道吗??
1 X; t( i4 Q9 V
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2014-6-5 17:09

回复 lxn90219 的帖子% k7 X7 r, S  T3 g9 |1 W. ^

0 J5 ]$ ]3 \7 C* G1 f! |* H. I  q& \4 c6 N  B9 T) R: \
  To lxn90219 :
4 S: X) T! y" c( _0 o4 f' \$ ]7 [
  m% m3 F( F3 y* E2 G# R3 a  不知道你是看到哪些文献中使用HeLa进行Tumorsphere Formation assay的?可信度是否很高?" [2 f' }0 s) V; f
6 a  ~* V& v: u. H5 y+ l
   如果你特别想进行这个实验,可以按照文献中的方法试试看。/ g- Z9 Y" {6 F4 q" H* A

2 s' P9 _: E3 A7 C    我个人不是太推荐。
作者: 深海寂寞鱼    时间: 2014-6-5 17:10

回复 Tim 的帖子
$ u# r7 m- D2 l% {* t& l
  [* i4 y, W' o$ h( @
" f5 g$ C" Q# `. B  你可以尝试文献中使用较多的:(DMEM/F12 + B27 + EGF  +  bFGF)无血清培养条件




欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5