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标题: Hela细胞转染效率低怎么办？ [打印本页]

作者: amosummer 时间: 2011-3-9 10:28 标题: Hela细胞转染效率低怎么办？

本人前两天进行Hela细胞转染，细胞于6孔板，约80%的覆盖度。用的是脂质体lipo2000。转染的是miRNA表达质粒，质粒自带EGFP绿色荧光基因。之前转MCF7细胞能够达到70%左右的转染效率。但这次转Hela细胞发现效率很低，只有3%左右效率，一般一个视野内只能看到4-5个被转细胞。请问有没有哪位高手转过这类细胞，用的什么方法？可以告诉我转染效率低的原因以及如何改善吗？

作者: qdong108 时间: 2011-3-9 11:47

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悬浮转染

作者: amosummer 时间: 2011-3-9 11:49

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能说的具体些吗？

作者: 亮亮燕燕 时间: 2011-3-9 15:58

不同的细胞系转染的最佳条件不一样，建议优化一下。还有转染用质粒纯化了吗？我们实验室有质粒不纯化就转染效率低的！

作者: runsong 时间: 2011-3-13 23:04

转染没啥技巧，根据我的经验，我感觉对于转染效率，脂质体质量、细胞种类状态、操作水平各占45%、45%、10%的权重。
脂质体假货很多，三支中可能只有一支给力。呵呵，买试剂的都是奸商。
海拉细胞的转染效率正常情况下不会低于60%，你最好先在脂质体质量、细胞状态上找原因。

作者: zuming 时间: 2011-3-14 15:39

hela细胞是比较好转的，你得看看细胞状态，质粒纯度，还有就是楼上说的脂质体是不是有问题。

作者: btyou8u 时间: 2011-3-14 16:59

HeLa是常用的工具细胞，应该是非常好转的，同样的lipo2000，同样的质粒，同样的操作，结果竟然是3%？/ N; B. B& {# c( q# X; A
确定所有试剂，所有步骤没问题，再做一次！！！

作者: 张也行 时间: 2011-3-15 19:57

本帖最后由张也行于 2011-3-15 19:57 编辑 & c5 q+ e0 E8 i' L) q

你的细胞怎么样？脂质体只能转染分裂的细胞，如果你的细胞状态差，分裂速度慢，转染效率会比较低。
可以用同样的质粒转其他好转的细胞，比如293细胞，看看是不是你的质粒，转染试剂有问题。
还有下次做的时候最好有一个阳性对照，不然像你这样出现了问题也不知道为什么。Good Luck！

作者: 做个好孩子 时间: 2019-8-26 13:28

“Lipofectin2000转染Hela细胞的转染效率才3％”，这个太低了，听我们隔壁实验室的同学说他们用RFect ,siRNA转染的Hela细胞，转染效率有80％左右的，会不会是你们转染前的细胞状态不好？

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