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标题: 紧急求助：染色体G显带 [打印本页]

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作者: lorey    时间: 2011-3-15 17:29     标题: 紧急求助：染色体G显带

同样的处理，第一个图没有胰酶处理，结果染色体还很漂亮，可是第二副图是胰酶处理40s后，成了那个样子，怎么回事呢？其他的条件完全相同啊。/ J+ G# B" O. t5 i# Y; A! L
另外，大家在做G显带时时怎么做的呢？

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作者: jefferson    时间: 2011-3-15 19:26

这两种核型都是不能做带型分析的, 都没显出带啊
* h) |* F, @( m) n" o2 s1 b- F9 ^. y& j0 J* q+ M5 O
两幅照片中的核型都不分散, 应该是低渗的时间短了, 或者滴片时高度偏低, 所以染色体分散不开, 这种核型只能作为看染色体数目是否有异常之用. 0 c) Y/ e( a7 H" w. q, j+ u
9 E# _9 E: y: I9 i$ u6 j1 ^$ `; p1 b
另外两个核型中的染色体都偏短, 下面一幅的稍好点, 但是还是短了, 应该是秋水仙素的处理时间过长导致的.7 ~+ {& p0 O* D3 R4 A, E- t! e) z

* E! b( Z3 Y2 y' Q) p胰酶消化时间过短就不会显出带型来, 没用胰酶处理的和处理过的都没带型, 说明消化时间不够. 另外上面照片中的染色体染色较深, 说明染色时间长了, 应同时多做几张片子摸索消化和染色时间. 消化不充分没带型, 消化过了的话, 染色体会发毛, 但还是会有带型出来.

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作者: ydj19830    时间: 2011-3-16 01:50

显带的话染色时间可以再长点点...& F$ g% p, w8 i
我做的植物的...

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作者: ydj19830    时间: 2011-3-16 01:56

滴完之后可以加一滴固定液（卡诺），让染色体铺开些。。。
# Y# M5 B# s3 c% \& s* p从你第一张照片看，染色体长度已经可以了，分的再开点可能更好...
+ [/ H- m" R( b% G4 f5 Q我用60度高温处理染色体过夜，有时候也显带...不过是植物的。

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作者: fananran2003    时间: 2011-3-16 08:34

学习了，一楼好专业啊，最近也做核型，效果也是不理想，楼主能不能给些详细的步骤和解说啊

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作者: lorey    时间: 2011-3-16 10:06

回复 jefferson 的帖子* O8 x) K, o0 [* d/ f& F' l

6 O  L! q2 j7 ]; f& ~" s# e# B两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。
7 T& g$ e- a% a; u# `8 {9 e$ ^2 L/ d
我做了秋水仙素处理0.5小时的，但是分裂相太少，几乎找不到染色体，那样时间是不是太少？
! W* x, x6 ?( x8 {# D# ^6 h) l% w
$ ^% V7 u& J: Q$ W+ c下面的图是消化不够吗？如果长了的话，会不会全都变黑？
1 S, X$ L: O6 s. O, L您能不能给我一个完整的Protocol呢？十分感谢！

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作者: jefferson    时间: 2011-3-21 15:56

lorey 发表于 2011-3-16 10:06 * P: V; R+ q; ?+ y$ G
回复 jefferson 的帖子
! [% y% X5 A4 P8 W: t2 ^, Y( t0 c+ p; v) F& G
两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。

2 [4 c5 R( F: h, L' g
不知道你的是什么细胞, 不同细胞在处理细节上稍有不同.9 J9 @. V0 L7 r% p3 H1 }1 |

0 C& S& o# f/ r秋水仙素不知道你用的是什么浓度的, 其存储浓度一般是20ug/ul, 对人血细胞来说, 工作浓度大概0.1-0.15ug/ul (估算). 处理2.5h 后收获. 细胞类型不同, 需要调整秋水仙素的工作浓度, 以具有较多分裂相同时染色体伸展较开为原则.
2 O+ x$ a' ~0 n# Q8 C( K# f3 c; `# a# a' x7 W$ \2 v# ~4 l
你的结果低渗的肯定是不够的, 染色体大部分还聚集在一起未分开. 所以需要注意下.
; @5 m; r3 Z  c! Q+ p9 x2 ^: Y& o! k. ^' q
关于消化, 还上面我的回帖里一样, 消化时间不够没条带, 消化过了也会有条带,只是染色体会有点发毛的感觉.

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