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标题: 求小鼠骨髓间充质干细胞的培养经验 [打印本页]

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-17 19:01 标题: 求小鼠骨髓间充质干细胞的培养经验

取的三周龄的小鼠四肢骨髓及骨渣，培养条件没有问题，营养充足，没有污染，但是原代细胞始终生长缓慢，贴壁细胞不足，形态伸展不佳，急求各位高手经验~~非常感谢

作者: death0270 时间: 2011-3-18 14:13

如果培养条件确定没有问题的话就换液去除杂质吧，太多组织碎块和血细胞是会影响MSC贴壁的。

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-19 14:26

培养三天后第一次换液，之后两天换一次，贴壁细胞数量始终不足，生长缓慢~十分不解

作者: 文武庙 时间: 2011-3-22 22:37

一般小鼠较人的生长慢一些，不知道楼主是否加入生长因子了吗？可以加因子促进一下。

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-23 13:51

回复文武庙的帖子% Q q+ h: \! V; A8 z- v$ I% O8 o
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没有加特别的因子促进生长，就是普通的含10%的胎牛血清的a-MEM培养液培养的，感觉用的三周龄的细胞活性应该比较好才对啊，但是长得很不理想~想问下，如果加因子的话，这方面您有什么经验么~望不吝赐教，非常感谢！

作者: onestar 时间: 2011-3-25 15:15

我看你首先应该把骨渣的问题解决~你可以购买 strainer，) l: U& r) `! T. `
把抽出来的通过strainer的话，就没有骨渣啦~
这样细胞贴壁应该很好~( M6 P7 W# N+ F( I

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-25 15:54

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关于骨渣分析有可能骨质中的一些成分或分泌的东西能够促进细胞的生长，特意留的。如果不要的话直接只提取骨髓~~试试看下。谢谢

作者: onestar 时间: 2011-3-25 15:58

因为我不是对骨渣有什么了解~目前我培养的就是骨髓干细胞，把骨渣去掉以后，剩下的长的挺好的。有时间带骨渣的我也试试看看~
呵呵$ I9 {$ D8 g' e6 h6 k o+ u

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-25 23:25

我养的也是小鼠间充质干细胞，直接用5ml注射器抽取培养基把骨髓冲出来刚开始会比较杂但换过几次液之后就长得挺好了

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-26 13:47

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嗯嗯，大家互相交流下经验，看哪样生长的最好，O(∩_∩)O~

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-26 13:49

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我们也是，用注射器先把骨髓冲出了，然后剩的骨就剪的很粉碎一起培养~最近试了下直接不冲骨髓，把骨直接剪碎培养，缩短操作时间，目前观察生长状况还可以，差别不是很大~

作者: death0270 时间: 2011-3-28 17:07

还有一种情况是这样的，细胞生长是有一个生长曲线的，只有细胞的密度达到一定程度的时候才会对数增长，一开始在密度未达到的时候是会有一个停滞期的。

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-29 16:51

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嗯~是，有考虑这个，发现密度太低的时候的确是很难良好的生长，是不是密度依赖性？除外这个在想还有没有别的因素呢

作者: zxdlala 时间: 2011-4-11 17:06

我的也是贴壁不老好，怀疑是不是其他的细胞。

作者: cheese 时间: 2011-4-11 19:34

我觉得可以不要骨渣只取骨髓，骨渣也可能影响干细胞贴壁。在早期细胞长的的确很慢，可是在第三天的时候基本上也可以看到贴壁的梭形细胞。可以加些生长因子试一下，还有就是血清和培养基的质量。

作者: asejon 时间: 2012-2-8 14:56

把骨碎片和细胞一起培养，细胞肯定会有一部分粘附在骨片上而不是培养皿上生长，因为自体骨的生物相容性非常好，这样岂不是会造成细胞的损耗?

作者: asejon 时间: 2012-2-9 20:03

骨片培养希望获得BMSCs，但是这也是获得成骨细胞的方法，成骨细胞从骨片在爬出，从而影响BMSCs的纯度，请问大家是否会有这方面的担忧？

作者: 15800896302@163 时间: 2016-12-20 10:52

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我养的也是骨髓间充在干细胞，也是用针管吹取的，但为什么我传代之后长的比较慢呢密度很稀，而原代的密度是基本长满的

作者: 细胞海洋 时间: 2016-12-20 14:32

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作者: 15800896302@163 时间: 2016-12-21 15:17

回复细胞海洋的帖子# n, ], N3 h) D" q/ B! C) B' T

好的谢谢

作者: asd525311592 时间: 2018-3-1 15:54

我也用这种方法培养的，容易贴壁，生长快啊，但是容易老化

作者: shangshiwang 时间: 2018-4-19 16:24

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是的，可能是培养条件有问题。

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