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标题: MSC传代密度求问经验 [打印本页]

作者: mbpsky 时间: 2011-3-18 11:16 标题: MSC传代密度求问经验

本帖最后由 mbpsky 于 2011-3-18 11:17 编辑

昨天MSC细胞传代，1：2传代，今天发现细胞已经长得满满的，有的已经开始老化，觉得传代时密度太大了，求问大家传代时密度怎么控制？各种细胞和代次方面有什么注意点么？培养皿和培养瓶有什么区别么？

作者: jefferson 时间: 2011-3-18 12:49

有文献报道MSC低密度传代有利于细胞的活性, 细胞增殖能力较强. 一般MSC 7代以后细胞就会出现老化现象.

作者: deron 时间: 2011-3-18 13:42

密度根据个人想象，基本上就是根据当前密度按照1：n想象。
传代方面，一般融合度的时候1：2——较高融合度的时候1：3——很高融合度的时候1：4，如果细胞长势特别喜人的话1：5都没问题。/ M1 C+ a% L% }' R; ~
培养用的瓶和皿，底面都是经过特殊处理的，我想没什么区别。9 j# Q0 ]' @" x' x: Y* r+ m
不同细胞的生长脾性确是不同，最好根据相关文献以及请教前辈们的经验。

作者: haoxinaok 时间: 2011-3-18 16:03

细胞状态好的MSC五代以前的细胞，我们按照1：5的比例传代，一般3天长满。状态稍差的我们也是1:4或1:3传代，很少1:2传代，不然传代太频繁，反而易老化。培养瓶和培养皿，底面都是经过特殊处理的，应该没什么区别。

作者: ndwzf 时间: 2011-3-18 16:31

1:5或1:4较为合适，太密易老化。传代中有分化现象，要注意观察和检测表面标记7 t/ U4 m R8 _9 A, ^
培养皿强于培养瓶。

作者: mbpsky 时间: 2011-3-18 17:43

回复 deron 的帖子% T$ I0 C4 G0 r6 K1 H. M7 }

哦，我今天又把昨天1:3传了一次，等明天看看细胞状态

作者: mason658616 时间: 2011-5-31 10:46

回复 deron 的帖子' B$ h" O$ [0 K$ B, d
- f! @! r7 m) l3 y
请问用的培养瓶大小有影响吗？我用25cm的，看别人有用75cm的，用的瓶子大有什么好处吗？

作者: zg_zj_hz_xyj@ya 时间: 2011-5-31 10:57

跟瓶子大小好像没什么关系，我25和75的瓶子都有养着，80%融合，按1：3传代，一般3天长满。不过最近都是1:4或1:5传，长一个星期，懒得经常去传代了。

作者: 大少爷 时间: 2011-5-31 11:25

我们做脐带间充值干细胞，第一次传代之前会计数，按照1*10^6左右每瓶接种传代，用175cm2的培养瓶。加20ml左右培养基。三，五天左右传二代。

作者: deron 时间: 2011-5-31 11:25

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: `9 X2 u Q! m
瓶子大小没有影响。瓶子大的收获的细胞量多。

作者: ww2zyl 时间: 2011-6-3 12:23

这个问题我觉得你应该自己做个小实验设计，把细胞分不同比例传代，比较下每个浓度的生长情况，摸索出适合自己的传代密度，毕竟每个细胞系的状态不一样，生长速度也就不一样，每个人说的也是自己的经验，还是要靠自己摸索!

作者: jj2570782 时间: 2011-6-4 20:04

MSC不能长太满，会老化的，一般融合70%左右就要传代了，
按1:3或者1:4的比例传，MSC增殖很快的，3天左右就可以长到60%,70%了( ~) F' A {- v
康宁的培养瓶，培养皿都用过，没啥区别！

作者: sdwzg119 时间: 2011-6-28 10:59

一般我都计数~按照2x10~6传代~或者直接懒得计数，按照1:3传代

作者: colinck99 时间: 2011-6-28 13:25

单纯传代话没什么差别，要诱导话还是25cm的好

作者: 352167963 时间: 2011-6-28 13:46

传代密度大概在0.9X104/cm2左右比较合适，太少或者太多细胞的状态都不会很好的。

作者: mbpsky 时间: 2011-6-29 11:17

不同组织MSC接种密度是不同的。真皮多潜能干细胞密度传代一般为1.2X105/ml，而BMSC一般为8X104/ml。一般是T75和T175瓶子

作者: mbpsky 时间: 2011-6-29 11:18

晕，才发现是我的帖子

作者: 细胞海洋 时间: 2011-6-29 21:09

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. y8 B' _9 y: G6 C! ?
呵呵

作者: 琛儿326 时间: 2011-6-29 23:00

传代时要计数，我一般按5000-8000/cm2传代。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-30 13:15

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6 Q% q9 f5 P3 ]4 d" d9 S9 n( B' c
细胞长一个星期那么长时间不会老吗？

作者: nydfy 时间: 2011-6-30 16:10

传代的目的是让细胞继续增殖，但需注意：保证细胞分裂的潜力，也就是说传的密的话有的细胞根本还没来得及分裂就被传代了，传的稀一点可以达到细胞增殖的目的！我们实验室一般按1:3传代，没有问题！

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