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标题: MACS分选老是堵管 [打印本页]

作者: shengxiaqq 时间: 2011-3-20 16:27 标题: MACS分选老是堵管

macs分选老是堵管呀，我是严格按照实验步骤来的呀，分选的是cd133的前列腺癌细胞，后来选出来的大约只有1%左右的细胞，做流式分析时发现几乎没有表达，前列腺癌细胞是不是不表达cd133呀，有没有知情大侠解释一下呀

作者: wwy551 时间: 2011-3-20 20:42

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建议分选之前用DNA酶处理一下待分选的细胞，或者用Dissociation Buffer处理一下，这样可能会好一点，而且在把分选的细胞样品上到柱子上的时候过一次300目的滤网，分选的细胞样品用1.5~2毫升PBS+BSA重悬，尽量稀一点，这样不会堵，分选的纯度也会很高。
分选的过程中如果堵了，可以把已经结合到柱子上的细胞推下来，重新过一个柱子，当然最好不要。4 a% w3 Z$ T- j9 g
像你这种情况也确实会造成最后分选的效率和纯度不高。

作者: zhuanzhuan 时间: 2011-3-21 08:32

你是养的细胞系呢还是从组织上分下来的呢？如果是养的基质细胞，用胰酶消化时间长一点，呈单细胞了再做后续操作；如果是从组织来的细胞，则需要过70微米的筛网了哦！

作者: amosummer 时间: 2011-3-21 08:42

我之前做分选也出现过相同的状况，分选柱到后面都无法动了。特别是一般做这个实验都在晚上，一不小心就到凌晨1-2点，做到头都大了。后来老师告诉我，可能没有消化完全，特别是还有一层黏膜。不过我也觉得可能细胞数量还是多了些，要么你拿少量的先试试，消化彻底些。有结果一起分享下，看是不是好做。因为我也特别想知道，只是最近没有样品来而已。

作者: wxyWXY 时间: 2011-3-22 18:44

关于做macs 请教一下啊我最近做了3次做完后发现收集到得细胞都已经死了能明显看到细胞里面得碎片怎么回事啊？原来以为是因为用塞子推压力太大后来试了次让细胞自己流下来细胞还是死。我染的是cd45 从es分化来得造血细胞

作者: shengxiaqq 时间: 2011-3-29 18:51

现在分选的时候不堵管了，就是加的1ml的buffer稀释，尽量吹打成单细胞悬液，在分选的时候用滤过膜过滤，尽量不要有气泡，任其自然流下，不要用器具在里面搅拌，这样可能会造成细胞粘连成团，反倒效果不好，多等会会留下来的

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