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标题: 求助：VPA [打印本页]

作者: docqbzcn 时间: 2011-3-22 22:39 标题: 求助：VPA

想把骨髓干细胞重编程为ipscs,但是效率很低，所以想加入VPA，使得最终浓度为1mM，计算是加入0.16ul，这也太少了，不好加，教授让我先配置working solution，从working solution里、再加到6-孔培养板内，但是working solution如何配置？有知道的请指教一下，谢谢

作者: docqbzcn 时间: 2011-3-22 23:07

知道的帮一忙啊，谢谢

作者: haixiaghx 时间: 2011-3-23 09:00

我也做药物实验，我是先配浓度较大的浓储液,如100mM，再稀释成1mM。如果直接配成工作液就需要加大液体量了，2ml加0.16ulVPA,100ml就加入8ul了。不过100mM的液体要在一周内用完，如果可以就这样直接配工作液。我认为最好配成浓储液，配好后随时加入一定量就好了。浓储液用PBS配，不含血清或血清替代物，可以长期保存。

作者: ada800515 时间: 2011-3-23 14:34

问一下VPA在哪个公司买的？

作者: docqbzcn 时间: 2011-3-23 15:46

谢谢，从invitrogen买的

作者: ghfvcat 时间: 2011-3-23 20:43

回复 ada800515 的帖子/ u; Y& K g) R% R

sigma有# r- ]+ A8 B1 \8 u$ s" l7 G' s
working solution就是工作液啊，你老师的意思就是让你一次多配点吧？
一般市可以配成储存浓缩液的，但VPA不知道溶解度怎么样，你可以试试，用没加血清的纯培养基稀释为10X乃至更高，使用时再添加就行

作者: ilulu1984 时间: 2011-3-24 22:51

请教配制VPA浓储液（100mM）时，是用DMSO还是PBS或纯水溶解呢？我试过用水溶，但溶解度很低，因此用DMSO溶解，溶解度恰为100mM。% i& [- @! q6 y A) X
问题是，对于DMSO配制的VPA 100mM 浓储液，若想达到1mM工作浓度，则10mL培养液中应添加100uL浓储液。然而培养液中DMSO浓度超过0.5%会产生细胞毒性，此时培养液中DMSO浓度为1%，已经超载。若想降低培养液中DMSO浓度只能将浓储液用量减半，即50uL, 此时VAP终浓度为0.5mM. 许多文章中讲到VPA终浓度为1mM甚至2mM，但却没有讲到VPA溶解方法，苦恼中，特向高手求教！

作者: snokey 时间: 2011-3-25 04:34

把我的实验记录贴给你吧，照着配就行了，在我手里效果那是相当的好:)" s9 `0 X- x3 F* ]# k: D
' E$ P8 X# P& B; f
Making VPA stock (250x stock)
MW: 166.2 g/mol = 166.2 mg/mmol ) m; N; X) M. ~' Q/ _. g
Working: 1 mM = 1 mmol/L = 1 umol/ml" _2 S2 q6 ~8 l7 j
0.25 M stock: 0.25 mol/L = 0.25 mmol/ml = 0.25 * 162.2 mg/ml = 40.55 mg/ml

DMSO溶解度是比PBS好，但是能用PBS就用PBS，但PBS中VPA溶解度有限，浓度弄低点，多加点就是了。按照我的配法，一个6孔板的孔（2 ml 培养基）加 8 ul 就行了，操作也方便。
VPA尽量用新鲜的，每次少配点。我用的是calbiochem 676380 Valproic Acid, Sodium Salt, iPS诱导起来完全OK

作者: ilulu1984 时间: 2011-3-25 22:23

回复 snokey 的帖子0 y7 F" e- e9 J. W0 ?3 }" ^$ p. ~
0 T, W- C4 U% k0 i% r
太感谢啦！VPA溶解于PBS后再用0.22um滤器过滤，分装后-20度保存对吗？. z' n3 ?2 T) |5 |( k& S* n) l
新手上路哈，见笑见笑:)

作者: snokey 时间: 2011-3-26 03:10

所有做iPS的化学小分子药品我从来不过滤（除了Vc），在我手里没有污染过。不过滤，还有另外一个考虑：有些小分子是溶于DMSO的，滤膜也许会受影响的。-80可以放久点。但最好用新鲜的，我每次配个1-2 ml，100-200 ul分装，每次用一管，用不完就扔了。

作者: ilulu1984 时间: 2011-3-28 13:09

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谢谢你的帮助！

作者: bllx58 时间: 2011-6-17 13:45

溶解问题：
一般市可以配成储存浓缩液的，一般按你最后加的多少乘来算，楼上已经正解' ]& E0 V/ ~: U: H
VPA可以用水溶，母液-20保存，一年内应该没问题，+ ?0 Q- N9 r0 ~9 n
k) ]- P* @7 |6 C' ]2 ?3 b1 p5 H
过滤问题：
一般不需要过滤，个人一直在用，重未见污染，
. v, m: T' M* R- I1 d1 I
另外VPA很毒，操作时做好防护，建议使用生物安全柜

作者: ciweiyuan 时间: 2013-11-26 15:04

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# H9 G6 Z5 `! K, j% h& v3 |
为什么是0.25乘以162.2而不是166.2呢

作者: 我爱火热的冬天 时间: 2014-2-20 12:48

是166.2吧，我现在手里拿着说明书呢，上面就是写的166.2

作者: 2374691002 时间: 2016-1-10 20:28

VPA Resuspend VPA in DMEM nutrient mix F12 to a final concentration # n7 D0 q" d- \4 ^; A& Q5 } F) B
of 200 mM. Filter-sterilize with a 0.22-μm syringe filter. Next, make
500–1,000-μl aliquots and store VPA at − 20 °C for up to 6 months

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