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标题: 小鼠骨髓间充质细胞传代消化问题 [打印本页]

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-24 21:39 标题: 小鼠骨髓间充质细胞传代消化问题

我今天首次传代消化了十几分钟对细胞影响是不是很大啊？很是担心

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-24 21:41

0.25%的胰酶没加EDTA 消化前干细胞状态很好现在很是担心

作者: 干细胞工作站 时间: 2011-3-25 00:22

时间长了些，消化时，细胞与细胞之间有空隙，变圆不脱落时就可以终止

作者: 亮亮燕燕 时间: 2011-3-25 08:29

嗯！时间有点长，我们一般消化5分钟左右！不过这也得分细胞，有的细胞比较难消化！

作者: deron 时间: 2011-3-25 09:06

小鼠就是很难消化。建议用sigma的EDTA胰酶消化，有助于提高消化速度，然后离心重铺培养

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-25 15:56

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楼主养的是什么小鼠啊？几周的？我们这边消化一般也不用这么长时间的~

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-25 20:30

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昆明小鼠 4周的今天看了下细胞状态还好不知明天会怎样祈祷中......

作者: xiao6tao 时间: 2011-3-25 20:57

一般细胞计数可以稍微消化长些，但是传代时不要消化那么久，一般我们也是5分钟。继续观察吧

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-25 23:11

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我当初没加EDTA是因为怕对细胞伤害太大唉。。。

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-26 13:44

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我养的也是4周的，不过是C57小鼠，正在观察中，原代长的不是很好~其他养的传代的时候也是难消化

作者: tangyvhuang 时间: 2011-3-26 18:56

小鼠的消化比较费劲，貌似动物个头越大越好消化，不知道是不是这样，我这里是这样，人的最好消化了。2 p2 m' m/ g# ]; a' B% }
对于小鼠我一般都是加edta的，加入酶之前先用pbs洗两遍细胞然后再加入酶去消化，

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-27 14:00

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嗯今天去换了液虽然细胞状态还行但明显没有原代的梭了应该主要还是消化时间过长的原因吧

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-27 15:01

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嗯今天换液看了下细胞状态还好但形态没有原代那么梭了可能是消化时间过长的原因吧

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-27 19:47

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哦这样子谢谢下次试试

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-29 16:45

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你可以试下，先用pbs在孵箱内孵育10到15分钟（完全去除血清的影响），然后再用热的胰酶消化，加入胰酶后用手不断平搓培养瓶底部，迅速就能消化下来~希望你的细胞状态会牛牛~O(∩_∩)O~

作者: 寒小溪 时间: 2011-3-29 21:54

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我又提了一批原代可以试试哈谢谢撒

作者: xiaozhu86 时间: 2011-3-30 10:50

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呵呵，不客气啦~共同学习~

作者: hfl1123 时间: 2011-4-19 10:37

消化时间过长会带有许多杂细胞

作者: 李1二 时间: 2011-4-20 11:15

我们做的时候一开始也加了EDTA，后来觉得好像状态不是很好就只用0.25%胰酶，放进37度培养箱内，一般3-5分钟，镜下看细胞变圆未脱落就终止，之后吹打的时候要小心，动作要轻柔，尽量不起泡。

作者: tigerfish 时间: 2011-4-21 10:07

同意楼上Typsin EDTA毒性相对来说比较大，一般我用3分钟就已经可以全部消化下来了，如果超过5分钟都还没下来的细胞估计就算最后下来也不会好好长了。
建议楼主试试看Invitrogen的TrypLE™ Express，这个贵一点，但是性质比较温和，但是消化效率比较高。建议贵重样本用这个来消化

作者: zxdlala 时间: 2011-4-21 12:05

不是吧，完了。我消化了10分钟。

作者: aibi1983 时间: 2011-5-11 15:17

我养的也C57小鼠，原代长的还好~但传代后细胞状态就不是很好，请问有什么好办法？

作者: 麻团 时间: 2011-5-12 15:48

我养的Balb/c 小鼠原代还凑活一传代就完了细胞稀稀拉拉长不起来请问大家有什么好方法

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