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标题: western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方 [打印本页]

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作者: runsong    时间: 2011-3-25 17:44     标题: western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方

做western blot时有时因为蛋白样品少，希望将一抗洗脱掉，再砸其他抗体。
# I3 [% S( N8 ~' o. y: W, ^  e望前辈提供配方。
0 f! O2 B0 |8 o2 y$ z! i注：我们不想买商品化的，以节约经费。

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作者: amigel    时间: 2011-3-25 17:44

我们实验室一直用的，放心绝对work

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作者: runsong    时间: 2011-3-25 19:12

顶起

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作者: amigel    时间: 2011-3-25 20:36

Stripping Buffer:
( e2 U6 i( ?+ j/ ~& d4.925 g Tris-HCl (pH to 6.7 in 200 ml of dH2O)  final = 0.0625 M: f7 e' R: {/ |7 B
3.52 ml ß-mercaptoethanol
, a0 N# W& Y% g$ }& z3 w; l5 w10 g SDS
2 ]' {+ H" j0 }: A' ZFill to 500 ml with dH2O: [+ I& P& y# e( t; \
7 X* C  j; _: t% [7 p, g
50度水浴保温30min后取出用大量TBST洗，封闭后再用抗体检测

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作者: amigel    时间: 2011-3-25 20:40

上面配方中是3.52ml beta-巯基乙醇

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作者: runsong    时间: 2011-3-25 21:19

回复 amigel 的帖子
! \" D0 J2 Z; c
9 a+ z/ t- w& H$ m7 z% ?这是你在网上找的还是你们实验室里验证过的

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作者: siyue13    时间: 2011-3-25 23:15

商品化的，才几百块一瓶，不贵的

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作者: hcluo    时间: 2011-4-28 16:49

本实验室使用的strips液：
: `& d* U1 c6 A2 \# D0.5M TRIs HCL (PH 6.8)   6.25ml) W7 R( N) Q( t; s7 p$ p, y3 b+ Q
巯基乙醇                         52ul4 H2 F. _8 n, p6 @
20%sds                           5ml. T  z/ v* d3 P( D; B  `  ?* x
加水至50ml  S4 r6 N3 z5 e' d, W

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作者: 王乾    时间: 2011-4-28 22:17

给你个最简单的，0.8M 的氢氧化钠30秒即可。

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作者: runsong    时间: 2011-4-29 21:45

回复 王乾 的帖子
& g; }$ O: J& N4 Z  T, _0 m9 I4 [9 j' K; |
谢谢，那温度有没有要求？

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作者: 王乾    时间: 2011-4-30 00:43

回复 runsong 的帖子
% \6 {( q3 o8 `+ }! |! ?& ~; `% S% |
室温

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作者: ophden    时间: 2012-7-22 17:13

回复 王乾 的帖子. f9 p: A% s& f" o) P/ m# j
. d* M6 G" S& G/ _
行不行啊？我试一试

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作者: 精神病院小萝卜    时间: 2012-7-23 08:40

30%的那种医用的双氧水，铺在膜表面，37度孵育15min，完了用TBS洗3次，就可以重新封闭杂抗体了

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