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标题: 干细胞冻存培养基 [打印本页]

作者: 下雪了 时间: 2011-3-26 16:48 标题: 干细胞冻存培养基

在别人的帖子里看到你的回复说干细胞冻存配方是培养基：血清：DMSO=7:2:1，多次实验后效果不错！我想问那个培养基是没有加生长因子的无血清培养基，比如DMEM-F12么？还是加生长因子的，跟培养时用的一样的？谢谢~

作者: 下雪了 时间: 2011-3-26 16:51

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我培养的是胶质瘤干细胞的，其中要加一些生长因子，比如EGF 、FGF-2 、LIF 、Hepes、肝素等，不知道冻存的时候要不要加这些因子，还是直接加入DMEM-F12就好了？

作者: 冠忠 时间: 2011-3-26 22:24

回复下雪了的帖子7 D/ N( O% ]- T7 M- U& U" ^/ Y

不用了，加了都没有用，浪费金钱。最好的冷冻液是: 6.8% DMSO (内有dextran40) + 93.2% FBS，我试过，基本上细胞死亡十分少。事实上，影响细胞活性最大的是降温方法，如果降温方法不好，细胞会死掉十分多。

作者: fengxuechunyang 时间: 2011-3-27 11:38

学习了' P/ Q: \2 t3 z6 s' T0 E9 z: m) `! a

作者: amosummer 时间: 2011-3-28 08:44

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请问我能将细胞存放在你所说的培养液中，然后直接放-80度吗？还是需要一个梯度？

作者: shen_coco 时间: 2011-3-28 21:28

肯定需要降温梯度的，先在4度冰箱放30min至1h，然后-20度冰箱放1-2h，然后放-80，最后放液氮里

作者: 下雪了 时间: 2011-3-29 10:03

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谢谢您的回复！请问“6.8% DMSO (内有dextran40) ”中普通的的DMSO中就有extran40，还是要新加入啊？另外FBS不会是干细胞分化么？

作者: 下雪了 时间: 2011-3-29 10:05

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您好！请问我们有平时冻存细胞用的特制冻存盒，直接放-80就可以冻存普通的细胞。可以用它冻存干细胞么？

作者: kostarcell 时间: 2011-3-29 10:22

关于冻存液的成分我一般都是90%血清+10%DMSO,不用加因子。; w, @- z# k0 @" A" `
关于梯度，我从来没有使用过，4度和-20这种梯度，放在冰里一会就转移到-80了，原理上冻存要慢，复苏要快，梯度肯定更好了。但也看你的时间和你的细胞情况。* Y8 t: U, k! I# T2 _
冻存盒一般的足够了，用不着什么专业用来冻存干细胞的。我也没见过“不普通”的冻存盒。

作者: 下雪了 时间: 2011-4-22 10:35

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哦谢谢哦~~

作者: 临床干细胞 时间: 2011-6-18 03:13

我不禁想问，培养基里就有FBS啊，这个7:2:1中的培养基的7，是包括FBS的培养基吗

作者: purehugh 时间: 2011-7-29 22:59

我们实验室一般用90%FBS+10%DMSO。; w$ h5 Z8 N& J1 M5 I
后来由于担心血清影响干细胞，改成了90% Knockout Serum Replacement (Invitrogen Cat#10828010)+10%DMSO., _& z- q4 @/ H
这样我至少可以在整个培养过程中不用考虑FBS的影响了。; u8 j, p3 s+ s) n
另外建议买一个特殊的冻存盒子(详细可看附件PDF)，虽然一次投入贵了点（$98 CAD）。可是跟细胞冻存后成活率偏低相比，也值了。

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