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标题: 第几代的脐带间充质干细胞适合细胞治疗用？有文献证明吗？ [打印本页]

作者: cl5823283 时间: 2011-3-28 17:47 标题: 第几代的脐带间充质干细胞适合细胞治疗用？有文献证明吗？

第几代的脐带间充质干细胞适合细胞治疗用？有文献证明吗？

作者: sdwzg119 时间: 2011-3-29 10:58

貌似是没见过类似的报道吧，一般认为越早越好吧，传代多了细胞可能老化，分化。

作者: xiao6tao 时间: 2011-3-29 11:15

间充质干细胞具有多向分化能力和自我更新能力，但是目前关于间充质干细胞体外培养过程中发生自发性恶性转化，关于期安全性有待进一步考证。

作者: jxydiandian 时间: 2011-3-31 08:28

3代到5代，经验之谈，仅供参考

作者: 肉丁 时间: 2011-4-2 23:10

不是要看细胞的状态？，一般4代后就比较纯了吧，可是还是得通过流式分析，看细胞是否分化吧

作者: 文武庙 时间: 2011-4-3 17:32

一般医院的干细胞中心临床会用P5的细胞，但公司实际操作也会用P7的细胞。

作者: yunshi503 时间: 2011-4-4 22:02

选择代数要和你的培养方法联系起来。普通的方法，干细胞会随着传代出现复制性衰老，细胞的分化能力改变、生物特性也出现变化。

作者: ytumuyangren 时间: 2011-6-7 17:53

我们没做过脐胎间充质干细胞的，我们用过骨髓和软骨混合治疗病人软骨缺损修复，效果很不错，但是我们都用的是原代的细胞，没敢采用传代的，文献中提出对于细胞的操作越多，细胞受损、形态发生变化的几率比较大。仅供参考，预祝你的试验成功，呵呵！

作者: hslh 时间: 2011-6-9 10:28

第7代，不过第5代也可以6 }! M+ Z5 F8 V- F7 o) P1 ~

作者: 大少爷 时间: 2011-6-9 11:34

间充质干细胞临床应用于解决多种血液系统疾病，心血管疾病，肝硬化，神经系统疾病，膝关节半月板部分切除损伤修复，自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。此外，间充质干细胞在神经系统修复及更多方面具有长远的发展前景。
一般用第二代的细胞开始治疗，首先，这代的细胞生长旺盛，细胞折光度好，立体感强，排列规则、整齐等等。注射到体内分化能力强，效果好。第三代及以后的细胞状态不好，分化潜能会有影响。传代过程中对于细胞的操作越多，细胞受损、形态发生变化的几率比较大，注射后还有癌变风险。

作者: namulow 时间: 2012-3-15 01:45

要成骨的话需要诱导后在植入骨缺损区吗还是直接植入呢我看不同的文献方法也不一样，有的诱导后植入，有的未加诱导。

作者: lazyworm 时间: 2012-3-18 13:17

我所知道的是P2代治疗，传代多了应该会老化。最近在学习无限细胞系与有限细胞系，是不是可以联系起来，要是间充质干细胞能传50代以上都还可以应该是变异了吧，会癌变，所以正常情况下应该是状态越来越不好，所以还是用前面的几代比较好。

作者: meister 时间: 2012-5-22 09:54

回复 cl5823283 的帖子
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目前没有代数限制。多数10代以内。也有8,5 等等。没有标准。区别也不大。
目前有体外大规模培养的间充质干细胞用于临床，代数肯定超过10代。

作者: zhujiang007 时间: 2012-5-25 11:01

临床治疗需要一定数目的细胞才能有效果，所以什么时候应用取决于细胞数量，培养时间，患者病情的综合考虑。原则上是在最短时间内培养出需要量的细胞，这就需要在传代密度，融合率和培养时间下工夫。

作者: yanwu_1 时间: 2012-6-8 16:06

做好不要超过三四代吧。毕竟细胞的体外扩增，有太多的不确定因素。论坛中有一篇文献，是《干细胞基础研究的新进展》，里面对于间充质干细胞的扩增，认为大部分都是MSC的分化后代，真正的MSC只是很少部分。认为间充质干细胞的扩增，只是分化后的细胞扩增，以及少量间充质的富集。
我觉得还是很有道理的。

作者: 帝国黑骑士 时间: 2012-6-8 16:22

个人认为，最好的是治疗阶段是在2，3，4代因为，刚开始传到第二代的时候相当于对细胞的一个帅选纯化，控制在5代以内是最好的。五代以后细胞的干性很难维持！自然效果也不会太好>

作者: shadowinpupil 时间: 2012-6-13 09:54

大多使用P3和P4，偶尔也使用P2，发现P3从形态等方面较好，P4有时会出现形态改变，培养基中代谢产物增加，建议用P2和P3。

作者: jiefengbing 时间: 2012-7-7 11:12

正常的培养条件下，早期会混杂杂细胞，P5较好。培养条件合适，P20做流式分析表型也挺好

作者: lele 时间: 2012-8-13 09:34

回复大少爷的帖子
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请问间充质干细胞治疗前都要做哪些检测呢？请指教，谢谢！

作者: 大少爷 时间: 2012-8-13 12:23

流式，无菌，无支原体，无内毒素

作者: 大胡子 时间: 2012-9-12 11:41

我知道的是P4

作者: firstaider 时间: 2012-9-27 22:53

一般是P3到P4，细胞代数低于3代，细胞表型都还不明确，不能确定细胞是否培养成功，更不可能用于临床，细胞代数过高，细胞的增殖活力会降低，分化能力也会减弱

作者: jenvy121 时间: 2012-11-14 13:50

回复大少爷的帖子; ?; u6 Z! [* G$ b$ Y* o. g

二代细胞纯度如何控制？细胞的均一性似乎会有问题，4代-6代之间的细胞最好了，当然也要看你的来源，自体骨髓来源按照上述控制最好，脐带羊膜胎盘等组织来源的8代以内应该没有问题

作者: songdianyin 时间: 2013-7-11 14:21

我们这边是P6、P7，，

作者: 三月桂花香 时间: 2013-7-15 14:04

一般是越近越好吧，我们之前最多是传到第三代这样子。

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-7-20 17:50

P5之前的吧

作者: 沙漠狐o0 时间: 2013-7-20 17:51

话说，我们现在只用第2代的。。。

作者: gejianyun 时间: 2013-7-31 13:41

我们一般3-5带左右，代次太低数量少，不经济；太高的话，分化、安全性问题就出来了。

作者: shuimochunlan 时间: 2013-7-31 14:37

我们都是三代或四代，从第三代开始细胞纯度就很高了，可用于治疗。太早杂质细胞较多，传代过多细胞质量退化

作者: uslzhang 时间: 2013-8-13 11:28

楼上讲的都是经验用法，没有证据证明究竟第几代合适。现在只能讨论一下经验中常使用第4-5代的原因：一般第4-5代细胞已经纯度较高了（流式检测达到了阳性大于95%，阴性小于2%），此时细胞数量也积累到一点定的量了，假如用低一些代次的细胞，检测成本相对较高，再往下传代容易出现细胞老化现象了，细胞形态首先就不好了，所以大家就这么传到第4-5代便开始用了，反正也没出事儿，至于效果好不好没人知道，效果好的皆大欢喜，效果差的就说是患者自己的原因，这还算好的，至少安全，对于那些真正乱来的，你都不知道究竟注射进去的是啥（你问他注射干细胞的剂量是多少，他回答说是5毫升），你说这干细胞是论毫升卖吗？反正打着干细胞的名义。这就是国内干细胞的乱象。7 T; X, ]' u5 }7 q0 {# Z/ \
其实应该整出一套标准来说明为什么，不过现在别说国内的，就算是美国也没有哪位干细胞高手敢说心里有谱能整出这么个标准。

作者: fay898 时间: 2013-8-13 12:12

有综述讲20代以内的都可用于治疗，但实际实验中，个人觉得10代内的细胞比较靠谱。要考虑增殖、形态、分化等情况。

作者: wf78365421 时间: 2013-8-30 10:42

本帖最后由 wf78365421 于 2013-8-30 10:46 编辑

同意楼上。
1、原则上不扩增的最好，毕竟体外培养环境与体内环境不一样。
2、目前，还没有一个统一的标准。" A- A5 \- K% q
3、一般10代内的细胞都可以。一般来说，10代以内细胞不会发生什么恶性转化之类。2 A% M. p& M3 v8 I% Y' l$ Y

作者: deshenglll 时间: 2013-8-30 10:45

回复 cl5823283 的帖子4 K" i# P$ O# H0 f
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没见过什么文章说过，不过一般2-4代比较好。1代之前细胞不够纯，5代以后细胞的状态各方面都有影响。

作者: xiaoyuwsp 时间: 2013-8-30 12:02

在理论上是代数越早越好，其实关键还是看细胞的生长情况，数量、活力及纯度。一般在细胞培养中，生长状况好的才往下面传代，为防止细胞变异，传代在5代，不超过7代。

作者: 屋檐上的乌鸦 时间: 2013-9-9 18:50

我们用的一般都是P3代细胞。效果还不错

作者: tianzhang 时间: 2013-10-17 15:31

附件文章有对脐带间充质干细胞不同代次之间细胞特性的比较，他们发现在表面标记在P15都没有明显变化

作者: uslzhang 时间: 2013-10-17 17:11

回复 tianzhang 的帖子
' @4 s/ K( K3 v2 P# Y% ]
您只提供了在第15代时干细胞的一个指标没有发生变化，并没有回答问题“ 第几代的脐带间充质干细胞适合细胞治疗用？有文献证明吗？”。干细胞的表面抗原发生变化与否，并不能完全代表它是否适合临床治疗。

作者: lasighter 时间: 2014-2-7 16:14

越早越好不要超过5代吧。

作者: jensn 时间: 2014-2-7 16:40

对于间充质干细胞用于临床治疗，目前我想最好保持谨慎的态度。我们的动物实验表明不同回输时间窗，不同细胞回输方式，不同细胞回输数量都对间充质干细胞在动物体内的归巢、增殖、分化等有不同的影响，更不要说使用不同代数的细胞了。尽管有文献支持3-5代是比较理想的回输代数，但这都是基于体外细胞分化的能力而言的，期间细胞既保持了比较高的增殖能力也相对原代来说比较纯。但是，细胞不是单一的一群细胞的堆积，而是会形成一定的细胞社会，这期间涉及信号通路、细胞与细胞之间的沟通等等问题，在这些问题没有得到更好的答案时，用于临床治疗是有失偏颇的。当然，如果作为临床前研究，也仅从细胞的增殖、分化能力来说，3-5代细胞理论上有优势，从回输所需细胞数量考虑，7代以后的细胞更合适。

作者: 屋檐上的乌鸦 时间: 2014-10-9 08:58

一般用的是P3代细胞，最多不超过P4代！

作者: xiaostou 时间: 2014-10-22 11:09

我记得韩忠朝每次开会都讲MSC，他们的代数比较高，大致15-20代作用，他们认为代数高的治疗效果更好。

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-2-6 10:27

回复大少爷的帖子
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专家你好，请问怎么鉴定细胞的代数？是根据培养时间么？

作者: weijunning 时间: 2015-2-16 10:39

我认为选择第几代与自己的培养体系有很大关系，不能一概而论说第几代的就是最合适最好的；我们的培养体系一般选择P4细胞，代数太低，细胞纯度不够，太高又容易老化；我们根据《指导原则》对所选取的细胞代数进行质量检测，只要符合《指导原则》中的质量指标，就可以应用在临床。

作者: lxy07 时间: 2015-2-16 11:26

我们这边是P3-P5代细胞回输，我做过检测P5代之前干细胞相关基因的表达正常，代数增高，表达会变弱，有的就不表达了，干细胞趋于分化。

作者: alicia_86 时间: 2015-2-27 09:43

我们脐带间充质干细胞应用还是挺多的。首先流式检测CD105、CD73、CD90的表达达到95%以上的话，P3，P4是可以做到的。并且原代和P1代细胞还有点杂细胞。P5代以后的细胞一般不建议用，有一些分化，我们检测的结果也不是很理想。最好都用P3代细胞。

作者: xiongwangyj 时间: 2015-6-3 17:49

现在确实没有标准哦！4 ~8 w8 B9 ?/ ~0 }# `( B K

作者: ywx6302706008 时间: 2015-9-14 16:22

我知道一家医院，他们用的是P2~P5代

作者: wuhuaguo88l 时间: 2015-9-17 15:12

我们实验室一般P2代就开始冻存了。复苏后，再传一代，就可以给客户回输了，应该是3-4代。

作者: ywx6302706008 时间: 2015-9-18 21:24

内容一般是p5以内

作者: ywx6302706008 时间: 2015-9-18 21:26

是的，韩说代数高对造血干细胞的克隆和分化更好

作者: 干细胞抗衰 时间: 2016-3-14 13:00

好的

作者: qinchuanniu 时间: 2016-6-23 09:31

用第二代MSC用前做过CD检测吗？有文献推荐阳性CD标志应大于98%，阴性CD标志应小于2%，第二代细胞往往达不到这样的指标，

作者: 大胖子阿哥 时间: 2016-6-23 10:31

3到5代吧具体得看采集到的脐带怎么样和分离效果，看看长得怎么样多说不好，还有关键的分离方法和用的培养基等因素多会影响细胞的传代

作者: 大胖子阿哥 时间: 2016-6-23 10:32

组织贴壁酶消化

作者: 微微一笑都是褶 时间: 2016-7-13 11:21

我们用的一般是P2-p5的。

作者: chenjxcd 时间: 2016-7-15 10:38

一般3-5代，最好别超过7代，从安全性考虑

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-3 11:25

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你说的很好，我觉的很对

作者: whywho 时间: 2017-8-7 10:32

3-5代以内吧，也是经验，五代以后的细胞更容易老化

作者: saner 时间: 2017-8-9 09:21

3代冻存，10代以内较安全，6代基因型相对稳定，10代以上风险就增加了。

作者: 逍遥过一生 时间: 2017-8-15 11:25

我们现在用2代的，效果比起以前的5代有着很好的提升

作者: chenjxcd 时间: 2017-8-16 16:11

一般用3-5代，7代以下基因变异不大；从文献和我们的动物实验数据观察，间充质干细胞未见癌变，安全性好，有报道有弱促瘤生长作用，没有定论

作者: 霸气的网名 时间: 2018-1-23 10:48

回复奇幻雪蓝的帖子

从你消化次数来算

作者: jiuxuya 时间: 2018-1-23 13:35

回复大少爷的帖子

现在你还这么认为吗？现在都是P5代。

作者: jiuxuya 时间: 2018-1-23 13:39

回复逍遥过一生的帖子9 E- c1 }' s: q: |4 D# ?
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你们用二代的跑过流式吗？纯度都不纯就给人输？效果能好？

作者: 18866398135 时间: 2018-5-23 10:34

我们用过5到6带的细胞，效果还可以，这还要看细胞的质量

作者: 1534672106 时间: 2018-7-25 16:24

回复奇幻雪蓝的帖子2 f) `! o! t% W7 p/ _% k$ d6 ]; P

用胰蛋白酶消化次数决定细胞代数，前提细胞长满，要不然有偷传代次数的意味

作者: 饼饼er 时间: 2018-8-28 15:48

通过采用贴壁培养法分离培养，传代到第三代，镜下观察细胞贴壁良好，融合密度达85%，流式细胞仪检测细胞高表达脐带血间充质干细胞标志CD44、CD73，不表达造血干细胞标志 CD34、CD45及主要相容性复合体标志物HLA-DR。说明脐带血间充质干细胞分离培养成功，且免疫原性低。# P" ?! X0 {9 w

之前在一篇文献上看到的。班门弄斧了

作者: suoweiyiran0411 时间: 2019-7-8 14:49

用的是P5代

作者: xrq525225044 时间: 2019-7-9 14:08

一般四五代就可以，要考虑细胞量与传代天数综合考虑，因为同样的传代次数，天数不一样，细胞的真实代数是有区别的

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2019-7-10 11:19

通过对 UC-MSCs P2 代与 P5 代细胞表型结果进3 w1 O; Z! M: ~3 I4 p, q$ P
行比对，培养至 P5 代细胞相对于 P2 代细胞表型
更加稳定，杂细胞少，建议推荐 UC-MSCs P5 代细胞1 N9 j! e1 |6 o4 t- u
治疗使用。

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