干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
brdu阳性细胞
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作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 12:49
标题:
brdu阳性细胞
请大家帮忙鉴定一下我染的brdu出了什么问题？？是神经干细胞。我是想问为什么胞浆也着色了，阳性信号不应该是这样的吧？用的是之前没有出过问题的抗体。请大家帮忙分析一下。谢谢。
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(2011-3-29 12:48, 389.51 KB) / 下载次数 273
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作者:
dxb1985
时间:
2011-3-29 15:38
你用2N盐酸处理了吗？
, M8 r% m2 Z% h( u' c) K* L. h
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 15:45
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dxb1985
的帖子
0 \' v6 b) F! I
$ K6 `$ K6 k/ k+ n
处理了，20min，是不是处理的时间短了？
作者:
aminhair
时间:
2011-3-29 19:20
对照组是什么样的？
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 20:27
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aminhair
的帖子
+ ]! ^% j; C5 k+ r/ S; h
1 M$ n8 [/ }0 w9 Y( r6 R
都是用的20min处理的，所有组都是这样的情况。
作者:
runsong
时间:
2011-3-29 20:32
用硼酸修复了吗
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 08:53
我们是4度2n盐酸处理1h，然后用0.1m硼酸（ph8.5）终止的
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 08:54
从图上看，好像一抗没有进入细胞核，所以估计盐酸消化不足
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:10
谢谢大家，我再试试。
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:11
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runsong
的帖子
3 A0 y( g& ?5 U4 J
( o+ V( o9 h# ]9 S
用0.1M的硼酸修复了，要不我再延长一下盐酸的时间试试吧。
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:18
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dxb1985
的帖子
2 X' N( A2 R+ ]5 r$ {. b7 d! B
# X+ ?+ O: V: y
看起来一部分细胞核是着色了的呀，请问为什么一抗没有进入细胞核而核却又着色呢？胞浆着色是怎么回事么？是一抗没有清洗好么？怎么能让胞浆不着色呀？
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 10:05
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angelyannan
的帖子
5 {. c U- I. w/ W7 h
0 I; t* ~; a- C7 d y; i: D
这就不知道了，嘿嘿，我给你看看我以前联系时做的吧
图片附件:
QQ截图未命名-1.png
(2011-3-30 10:05, 537.55 KB) / 下载次数 1
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作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 10:06
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angelyannan
的帖子
) k/ M# @- j" p- x6 v
( u$ V2 n% D, s# a! Q
总觉得你的背景不对
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 20:14
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dxb1985
的帖子
- C( I0 S( D% V+ W& m: ?3 Y
; ~+ B$ G7 e4 B* l" L
谢谢啦，我再试试
作者:
dyg108
时间:
2011-4-1 09:24
按照我的理解，胞浆着色是正常的。
: {2 _, m- b7 z7 Q
" }/ o. i* R* P% M) f0 E% a
因为，Brdu标记的DNA，而一般大家认为的DNA是在胞核里的，但是，线粒体里也是有DNA的，所以也会着色。在Brdu标记时间不长的情况下，胞浆里的颜色会重些，随着细胞分裂的进行，胞浆和胞核的Brdu含量都会降低，那时候可能只能看到胞核着色，或者都不着色了。
( _6 i" `' D9 v$ u; B
( D1 N7 B! q! I" H) A/ a6 ^
所以，用Brdu标记应该考虑一个时间的问题。时间过长可能出现假阳性，时间太短就会出现你刚才说的问题。
作者:
dyg108
时间:
2011-4-1 09:28
顺便说一下，你要把你图片的放大倍数说清楚，要看核的着色最好用×100或者更大，低倍镜或者更低是难以说明问题的。现在这张图片就看不太清楚着色的究竟是胞核还是胞浆。
作者:
angelyannan
时间:
2011-4-1 12:13
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dyg108
的帖子
- B0 A. Z8 Y3 v& h$ t
6 E3 s" H0 z, \+ y2 D' l
好的想，谢谢提醒~
作者:
shuicaoxi
时间:
2011-11-25 19:12
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angelyannan
的帖子
A1 w3 k+ \3 y( v5 @
' y/ |% R3 S" ]# ]; A5 O- z
楼主同志，怎么没有后续解答了呢，要善始善终嘛，你后来是怎么解决的呢。我也要做这个实验了，嘿，请教下经验呀！
作者:
angelyannan
时间:
2011-11-26 09:10
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shuicaoxi
的帖子
$ f2 i n5 o- {1 o
/ m2 W7 I$ H( V1 R' I$ o
我的主要原因就是盐酸处理没有把握好，现在我的是2N盐酸处理25min左右（37min），效果还可以~不过这个处理时间还要根据温度变化有所调整，这个还得你自己摸索自己的条件了~
作者:
shuicaoxi
时间:
2011-11-26 09:44
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angelyannan
的帖子
; f7 S9 n, E5 I. r/ j- c$ A9 G
! B: r- \, m- f, P/ K9 i
哦，好的。多谢你的经验分享哈！多问下，2N盐酸就是2mol/L盐酸吗？
作者:
angelyannan
时间:
2011-11-26 10:46
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shuicaoxi
的帖子
) ~1 d" _: l1 Q( R! t8 Q. B1 ~+ z
. s, J X1 h, N* a' d
是的~
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