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标题:
brdu阳性细胞
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作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 12:49
标题:
brdu阳性细胞
请大家帮忙鉴定一下我染的brdu出了什么问题？？是神经干细胞。我是想问为什么胞浆也着色了，阳性信号不应该是这样的吧？用的是之前没有出过问题的抗体。请大家帮忙分析一下。谢谢。
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http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjM4NzZ8MmI0ZDhmYjZ8MTc5NDMwMjMzMnww
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-29 15:38
你用2N盐酸处理了吗？
5 [) z2 \- ?. h! }' n
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 15:45
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dxb1985
的帖子
" h, M2 M7 a4 _1 k( r0 {
a' P8 t! r ?1 \4 ~- B9 R: V
处理了，20min，是不是处理的时间短了？
作者:
aminhair
时间:
2011-3-29 19:20
对照组是什么样的？
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-29 20:27
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aminhair
的帖子
! C8 B, u( y* ~
* v& V) J% {/ A% v2 [
都是用的20min处理的，所有组都是这样的情况。
作者:
runsong
时间:
2011-3-29 20:32
用硼酸修复了吗
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 08:53
我们是4度2n盐酸处理1h，然后用0.1m硼酸（ph8.5）终止的
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 08:54
从图上看，好像一抗没有进入细胞核，所以估计盐酸消化不足
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:10
谢谢大家，我再试试。
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:11
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runsong
的帖子
3 L7 X, D' ]" J! \
. A" [( L! _% r% ?6 e
用0.1M的硼酸修复了，要不我再延长一下盐酸的时间试试吧。
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 09:18
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dxb1985
的帖子
9 A7 [8 ]$ h9 E8 J! _4 m
; j. U5 x* Y/ I* z: h7 p; y
看起来一部分细胞核是着色了的呀，请问为什么一抗没有进入细胞核而核却又着色呢？胞浆着色是怎么回事么？是一抗没有清洗好么？怎么能让胞浆不着色呀？
作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 10:05
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angelyannan
的帖子
H: K$ F) M3 d
; Q" K [( L) V7 W
这就不知道了，嘿嘿，我给你看看我以前联系时做的吧
图片附件:
QQ截图未命名-1.png
(2011-3-30 10:05, 537.55 KB) / 下载次数 1
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作者:
dxb1985
时间:
2011-3-30 10:06
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angelyannan
的帖子
4 c# a5 H: N. w* Q8 Y+ O
% i! y4 K+ Z9 g$ v. {" `
总觉得你的背景不对
作者:
angelyannan
时间:
2011-3-30 20:14
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dxb1985
的帖子
8 V- b- |, O* W, _: ~2 T
9 G' {# K% B+ C" J l( P! w
谢谢啦，我再试试
作者:
dyg108
时间:
2011-4-1 09:24
按照我的理解，胞浆着色是正常的。
8 h% e1 Z# H+ x j2 t5 h
. G( B5 y, V3 {2 ?5 E9 {
因为，Brdu标记的DNA，而一般大家认为的DNA是在胞核里的，但是，线粒体里也是有DNA的，所以也会着色。在Brdu标记时间不长的情况下，胞浆里的颜色会重些，随着细胞分裂的进行，胞浆和胞核的Brdu含量都会降低，那时候可能只能看到胞核着色，或者都不着色了。
5 w* P6 z* Q1 {) B O. H! U
9 k1 f% m E& {9 |
所以，用Brdu标记应该考虑一个时间的问题。时间过长可能出现假阳性，时间太短就会出现你刚才说的问题。
作者:
dyg108
时间:
2011-4-1 09:28
顺便说一下，你要把你图片的放大倍数说清楚，要看核的着色最好用×100或者更大，低倍镜或者更低是难以说明问题的。现在这张图片就看不太清楚着色的究竟是胞核还是胞浆。
作者:
angelyannan
时间:
2011-4-1 12:13
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dyg108
的帖子
1 r$ ^3 p6 a* `: t! g
# U `6 V. |1 r/ [. C
好的想，谢谢提醒~
作者:
shuicaoxi
时间:
2011-11-25 19:12
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angelyannan
的帖子
" ~" @2 Y+ B. D
8 ]: N! ?9 i' P1 Y0 L
楼主同志，怎么没有后续解答了呢，要善始善终嘛，你后来是怎么解决的呢。我也要做这个实验了，嘿，请教下经验呀！
作者:
angelyannan
时间:
2011-11-26 09:10
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shuicaoxi
的帖子
$ y! z8 [$ q" n# ~% \8 l( J, |0 t
9 t0 a# C% w3 ~' ~ }7 k
我的主要原因就是盐酸处理没有把握好，现在我的是2N盐酸处理25min左右（37min），效果还可以~不过这个处理时间还要根据温度变化有所调整，这个还得你自己摸索自己的条件了~
作者:
shuicaoxi
时间:
2011-11-26 09:44
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angelyannan
的帖子
: L8 S { ^; D) q
. K/ U- \3 U% q
哦，好的。多谢你的经验分享哈！多问下，2N盐酸就是2mol/L盐酸吗？
作者:
angelyannan
时间:
2011-11-26 10:46
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shuicaoxi
的帖子
( a* M8 P0 C/ \- N
2 A# `. n+ F5 g( g" S
是的~
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