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标题: 质粒的问题 [打印本页]

作者: heiguzi1988 时间: 2011-3-31 21:46 标题: 质粒的问题

我用的是PUC19 质粒。长度2.686Kb。而要连接的片段有2.9K大小。觉得这个PUC19 小了些，连接效率低了。是否有能够大一些的质粒？大小约在3.5K-6K左右为佳。（PUC19的条件都很好，唯独短了些。）要求是有个抗生素基因，含常用的多态性酶切位点区域，如果有可以做蓝白斑筛选的Lac Z基因最好，没有也没关系。请问谁能告知一下。谢谢啊！- c0 j) c! } y# ~9 C9 b# p( u

作者: jun8013 时间: 2011-3-31 22:28

有lac的几乎都是3K左右，表达载体一般大，但是无lac z，只能用菌液PCR鉴定了

作者: jiays 时间: 2011-3-31 22:52

PWPTS载体有amp抗性，链接2-3K没问题

作者: Pseudomonas 时间: 2011-4-1 05:15

pETBlue 质粒同时可以进行蓝白菌落筛选和T7启动子表达，大小是3.5kb，应该符合你的需要。Novagen的质粒。

作者: amigel 时间: 2011-4-1 16:48

pGEM-系列载体都可以吧,

作者: ambassador 时间: 2011-4-1 19:53

本帖最后由 ambassador 于 2011-4-1 19:55 编辑
" |: |: F: Q+ C/ r. b0 j! `$ g1 m
用这个吧！/ ^! ?# Q& Y+ i0 m3 M; G3 t& g5 U
PMXS-IRES-NEO,片段大小：5.822kb，' t2 m8 j9 }7 [; Y
含有很多普遍的酶切微点，卡那霉素，新霉素抗性基因。
今天正好验证了这几条，你要的话我可以赠一点给你咯！

作者: 274996064 时间: 2011-4-1 20:49

我以前也用PUC连过这么大的片段没有问题你要注意片段的比例和使用的连接酶这两点是关键# u5 C0 K, Q4 D: S' d# L
我一般用的连接比例是这么算的一般用到片段和载体的摩尔比在2：1到10：1即可连接酶可以用PROMEGA的T4dna连接酶

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