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标题: 为什么筛个稳转株这么难 [打印本页]

作者: mckf111 时间: 2011-4-1 21:44 标题: 为什么筛个稳转株这么难

现在用pEGFP-IRES2载体转染黑素瘤B16F10细胞筛选前转染效率有20% 先1：10传代再用700-1100mg/L G418分组筛选基本3天后就没什么绿的了我晕两个月啦就这么耗时间后面实验。。。/ T7 y0 X3 `! ?8 d
大家有什么建议啊

作者: runsong 时间: 2011-4-1 22:02

pEGFP-IRES2表达gfp就是不稳定，我也遇到过转pEGFP-IRES2的细胞过两天就不亮了。据说是因为IRES启动gfp的效率太低。
你要不用pEGFP-C1试试。

作者: jiays 时间: 2011-4-2 08:09

建议用慢病毒转导吧，效率可以达到90%，我也是同样的情况3个月只筛出一个稳定株，用慢病毒1个月搞定了4株，后续试验也比较稳定- S3 P1 `8 g! L4 r

作者: mckf111 时间: 2011-4-2 09:24

回复 jiays 的帖子
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咱们实验室级别不够啊哪有那东西

作者: mckf111 时间: 2011-4-2 09:26

回复 runsong 的帖子
* G0 g) E$ `+ s3 M7 K, @1 B/ p
实验室没这种质粒你能惠赠点么

作者: jiays 时间: 2011-4-2 10:41

可以，共三个质粒，你有293T细胞就可以包被

作者: runsong 时间: 2011-4-2 13:44

回复 jiays 的帖子4 A$ V# W& i7 \0 b/ o' c4 S- c: c
/ h0 K+ t m/ D- T* f
你好，我也在做慢病毒的东西。用的是别人赠送的包装质粒，用293t包，但感染效率太低。你能把你们用的载体图谱和操作步骤发个我吗。
邮箱：5595758@163.com; E! l7 ]* l5 l: o
不胜感激！

作者: mckf111 时间: 2011-4-10 11:47

顶起

作者: ambassador 时间: 2011-4-11 13:35

试试PMXS-IRES-Neo这个载体，抗卡纳霉素抗性！估计效率高些。。。

不过如果要插入GFP，就不知道会不会降低它的效率了!

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