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标题: 二次PCR怎么设计才好? [打印本页]

作者: sidalin301 时间: 2011-4-9 19:29 标题: 二次PCR怎么设计才好?

第一次PCR有单一明亮的条带, 想多扩增几管备用, 于是直接取第一次的PCR产物1ul 进行了二次PCR, 结果是模糊的一片, 请问有谁知道是什么原因?
这种做法我以前尝试过多次, 结果都还可以, 突然有一次就这样了, 想不出什么原因, 郁闷!

作者: amigel 时间: 2011-4-11 10:19

把第一次PCR产物做个系列稀释,10倍100倍,这样然后取1ul扩.

作者: LiuRoc 时间: 2011-4-11 10:45

一扩的引物是特异性的还是兼并性的？若是兼并性的二次扩的时候需要提高退火温度。

作者: sidalin301 时间: 2011-4-12 15:48

回复 amigel 的帖子
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谢谢！今晚就采用这种方法试一下！

作者: sidalin301 时间: 2011-4-12 15:50

回复 LiuRoc 的帖子

一扩的引物是特异性的，就只有一条明亮的条带，以前这样做过很多次，都没有失过手，不知道这次是什么原因？

作者: sidalin301 时间: 2011-4-12 15:51

百思不得其解啊，郁闷!

作者: regene 时间: 2011-4-13 14:39

模板浓度太高，稀释就好，其实还是巢式PCR效果最好。

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