干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 第一次养小鼠骨髓间充质干细胞，大家看看 [打印本页]
作者: zxdlala    时间: 2011-4-11 17:15     标题: 第一次养小鼠骨髓间充质干细胞，大家看看

KM小鼠，至少2个月大了，DF12，全骨髓贴壁法，36小时首次换液后拍照
, ^2 s1 C- S9 s" H  \ 压缩后IMG_4477.jpg 压缩后IMG_4472.jpg

图片附件: 压缩后IMG_4472.jpg (2011-4-11 17:14, 727.35 KB) / 下载次数 337
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjQ5MjR8OGViOWFhMTN8MTc5MzQ2OTE1NXww



图片附件: 压缩后IMG_4477.jpg (2011-4-11 17:14, 753.71 KB) / 下载次数 333
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjQ5MjV8YzRkNzUxYWF8MTc5MzQ2OTE1NXww

作者: zxdlala    时间: 2011-4-11 17:17

看着很不舒服啊，好多细胞叠在一起了，不知是怎么回事，另外细胞也没变形，不知道这种情况是不是正常啊（100X）
作者: cheese    时间: 2011-4-11 19:55

两个月有点大了，细胞看起来很杂，而且成团，没吹打开吧？！
作者: zxdlala    时间: 2011-4-11 20:21

是没吹开吗？我还以为是吹过头了，细胞黏在一起了，下次多吹吹看看。
9 p; D. B$ f6 {4 x# @' \
$ \% l( C) O0 [% R, f我记得反复抽吸骨髓的时候培养基的黏度变得很大。后来又加了一点稀释一下就好多了
作者: zxdlala    时间: 2011-4-11 20:22

回复 cheese 的帖子+ v: f6 s$ X% z/ I2 l- d3 e% s' _. B/ }
1 I, ]1 F+ Y; G  X( h9 q- z
我在论坛上见有人养老年SD大鼠的，也都养起来了，我这是第一次练手，就把最老的那个杀了。
作者: cheese    时间: 2011-4-11 20:32

回复 zxdlala 的帖子
& h6 q- R" [' H0 t% _$ A5 Z5 O7 l5 @1 c- K9 I! r9 ?* r
大鼠的细胞比小鼠的好养，而且我觉得你可以多加些培养基冲骨髓，最后可以用1ml注射器将细胞转移到培养皿。
作者: smallboar    时间: 2011-4-12 00:23

图片不清楚啊！第一张图上还看得见有细胞贴壁。大部分是红细胞吧。第一次换液时间可以延长一些，我一般48h换液，甚至72h。
作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 11:48

缩小IMG_4523.jpg 缩小IMG_4522.jpg
" p  |2 {! ]. d$ M/ @1 k% s. Z7 y& N- c- p: e: |3 X
接种后第三天。有贴壁细胞了。但是不知道是不是干细胞

图片附件: 缩小IMG_4522.jpg (2011-4-12 11:47, 648.96 KB) / 下载次数 270
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjQ5NzN8M2Q2NTM4ZjB8MTc5MzQ2OTE1NXww



图片附件: 缩小IMG_4523.jpg (2011-4-12 11:47, 706.51 KB) / 下载次数 307
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjQ5NzR8ODE1OTE1Nzh8MTc5MzQ2OTE1NXww

作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 11:49

回复 smallboar 的帖子
& P6 {* i$ F; z) Y: C. r$ y
. U8 i" e9 w/ }我在丁香园上看见有一小时首次换液的，下次我试试延长时间。
作者: hfl1123    时间: 2011-4-12 11:55

换液的时候用PBS冲洗几遍，感觉还是有很多漂浮细胞么
作者: gaorongbest    时间: 2011-4-12 12:19

回复 zxdlala 的帖子
* |# d6 k( E9 H0 Y2 M  K: i8 |
! E( }$ n( q8 Q2 @这张照片看着还行，和间充质细胞有些像，之前那细胞应该照的是红细胞，你可以尝试接种后几小时换液，去掉红细胞，我们这样养过，大鼠的月龄不要大，我们养的2月龄的就不好，用几天龄的养的就长的好
作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 15:28

回复 hfl1123 的帖子2 v% q, {( {& S) J5 x

: V& B  {' z1 j& [我还没有洗。准备明天换液的时候洗洗。
作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 15:30

回复 gaorongbest 的帖子- I4 c  S* w- N5 b' ]7 }

9 j6 W  T$ l  u6 g- X我养的是小鼠，你们几小时换液的，我用的一般的玻璃瓶，不知道1小时敢不敢换液啊
作者: alioli    时间: 2011-4-12 17:07

两个月的小鼠MSC培养应该没有问题，我曾经养过半年以上的，状态还行。7 ^3 o9 g) Z% o, N3 w
后面两张照片看来细胞状态还可以，原代培养前几天MSC基本都是这种梭形的，随着时间延长会逐渐变得扁平一些，并形成集落。
作者: onestar    时间: 2011-4-12 18:00

我建议你48小时后第一次换夜，可以看看文章为什么，我这文章不知道弄哪去啦，能找到的话在给你发过去~
/ ]: E  y: I' F% l" r9 E# G上面图片不能说完全是msc ，我看也有不少~
) R  j8 r4 e3 |6 A& B% i再接再厉  fighting·~
作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 19:07

回复 alioli 的帖子
# b* ]% l1 @7 o+ P
) \. o7 e5 e% X' a/ v% h8 q期待增殖期的到来
作者: zxdlala    时间: 2011-4-12 19:08

回复 onestar 的帖子4 {7 ?3 i' X0 u6 T

# \: [4 o, A, E$ u5 T. z) H3 Y谢谢了，下次我试试48小时换液看看有什么不一样再来汇报。一起加油！
作者: 农夫有点田    时间: 2011-4-12 23:23

三天的细胞还不错的 换了液传代就好了 有点红细胞不碍事的 要看是不是你要的细胞最好是做表型检测啊
作者: zxdlala    时间: 2011-4-13 13:41

接种第四天，换了次液，用PBS洗了一次，有意思的事出现了
! ]( t' x0 T) O. ?3 f 缩小IMG_4560.jpg 1 m- a" Q+ C; ~; h3 N& ?
细胞长的非常有规律，基本都是一道道的长的4 g. F3 w' h9 }* a/ B
缩小IMG_4539.jpg
: Q7 ]* u, I# C2 Z这一大块不知道是什么东西，换完液后好像不明显了

图片附件: 缩小IMG_4560.jpg (2011-4-13 13:37, 744.96 KB) / 下载次数 155
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjUwMzl8NmFlNjBkOTR8MTc5MzQ2OTE1NXww



图片附件: 缩小IMG_4539.jpg (2011-4-13 13:38, 629.17 KB) / 下载次数 161
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjUwNDB8NDg5ZTkyODV8MTc5MzQ2OTE1NXww

作者: zxdlala    时间: 2011-4-13 13:45

缩小IMG_4544.jpg
9 \3 m9 k1 ?1 s. o' H这两团也不知道为什么细胞会聚集到一起

图片附件: 缩小IMG_4544.jpg (2011-4-13 13:44, 776.92 KB) / 下载次数 192
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjUwNDF8NDcxZTVjMmN8MTc5MzQ2OTE1NXww

作者: 如来的观音    时间: 2011-4-13 17:29

回复 zxdlala 的帖子; [# N, w/ S( N, w3 r9 X
' Q1 Q' T# M5 s' J* K) [5 e
据我看呢，是成团生长的细胞，密度过大，相对接触到的营养就少，形成蒂后漂浮着，换液时随着冲洗就掉了。
作者: 如来的观音    时间: 2011-4-13 17:31

回复 zxdlala 的帖子* C5 s4 v0 C" G- W; c
, N1 V6 |; Z  |+ M1 f/ T% u
MSC有时候成团长好像是因为细胞间的互相影响，就像是群居动物样的。所以一般没几天就要传代吹打
作者: gaorongbest    时间: 2011-4-14 08:18

回复 zxdlala 的帖子
7 g# I+ s1 H: ~, B; R+ l5 A" P! G, ?1 W# [
我们养的是大鼠的，小鼠的不清楚，没有用玻璃瓶养过，不过我觉得用玻璃瓶养的挺好的，别人养，也是用一次性塑料的培养瓶养的，你可以试试；你可以将上清液2-4小时后吸出来重新培养，看上清中是否仍有MSC，这样就知道几小时换液更合适了
作者: gaorongbest    时间: 2011-4-14 08:21

回复 zxdlala 的帖子
; j$ W# X& B3 M
3 V! W& {; D6 a, R. ?; R! B8 `上面聚的是血细胞吧，下面贴的是MSC，血细胞聚在一起没什么影响，MSC会形成一个个的小克隆
作者: zxdlala    时间: 2011-4-21 12:21

第十天，细胞不太好了，一起养细胞的说是中间密度太高挤死了，我也不知道怎么回事，发上来大家看看吧
5 P( f" O2 y6 S9 I: o6 J/ W+ T) h IMG_5125.jpg缩小.jpg IMG_5121.jpg缩小.jpg

图片附件: IMG_5121.jpg缩小.jpg (2011-4-21 12:21, 763.97 KB) / 下载次数 154
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjU2NDJ8N2ZhZGE1YTV8MTc5MzQ2OTE1NXww



图片附件: IMG_5125.jpg缩小.jpg (2011-4-21 12:21, 825.6 KB) / 下载次数 162
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjU2NDN8ZmJlYmEwMTd8MTc5MzQ2OTE1NXww

作者: zxdlala    时间: 2011-4-21 12:22

我把他传代了，第一次做传代，消化的时间有点长，10min。希望它还活着
作者: zxdlala    时间: 2011-4-21 12:23

基本上每个克隆中间都有几片这种暗区。可能就是挤死了吧
作者: sun_happone    时间: 2011-4-21 13:22

zxdlala 发表于 2011-4-13 13:45 ! B6 s& a2 S$ q; o* f' W! w
这两团也不知道为什么细胞会聚集到一起

! D5 D1 f5 @  Z, [& X& c# F' K我们养的大鼠的，也有细胞聚集成这样的，到底是什么呀
作者: 飞翔的十字架    时间: 2011-4-22 12:45

MSC应该是一种贴壁能力很强的细胞 1973年Friedenstein得实验证明2h内95%的MSC都贴上了，但lz用玻璃瓶的话可能MSC贴的不会特别好，我做原代的时候发现塑料瓶就比培养皿贴的好，所以应该是基底的原因。后面几张照片都不能说明问题，有聚团的漂浮物也很正常，但是细胞形态不是很经典的那种，但可以接着养，我经常碰到开始状态不好后面慢慢变好的情况。如果发现集落中间实在太挤了，可以试着传代。
作者: zxdlala    时间: 2011-4-25 19:59

回复 飞翔的十字架 的帖子
5 Y9 O2 Z% c) I
  J8 d1 z1 N& A典型的应该是什么样子的呢？



欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5