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标题: 肿瘤细胞复苏后为什么不能存活？ [打印本页]

作者: amosummer 时间: 2011-4-19 15:59 标题: 肿瘤细胞复苏后为什么不能存活？

年前回家冻存了一批细胞，年后回来复苏重新培养。我冻存用的是90%+10%DMSO，步骤是直接放-80°。但复苏后发现细胞两星期都没有长出来，里面飘着星星点点类似血细胞的东西，一个师兄说是细胞碎片，没有真正的细胞。不知道是什么原因导致的，是否我冻存的方法不好呢，或是复苏的时候需要什么特殊条件吗？

作者: hndxws 时间: 2011-4-19 16:04

冻存方法有问题。直接放-80是错误的。冻存应该是慢冻快溶。一下子放-80，细胞几乎都会死的。可以网上搜一下冻存与复苏的方法，改进一下。

作者: nicolelea 时间: 2011-4-19 16:31

如果直接放-80，需要一个缓慢降温的冰盒，或者至少你要用泡沫啥的给它包起来，让它慢慢冷却。【快复慢冻，以防止冰晶破裂，引起细胞受损】, N* A! L7 F- b$ }- k! w4 x
有条件，可以买个商品化的冰盒。4 q* H }' m5 p/ h
没条件，我们实验室是4°C，30min; -20°C 30min（或冻实）；-80过夜；液氮保存。【这个是冻一般肿瘤细胞的，不知道你的是啥细胞】
另外，冻存效果和你离心也有关系，离心力不能太大，太大细胞也会破。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2011-4-19 16:56

楼主所说的直接放-80是用什么放的呢？冻存盒吗？如果是程序降温（异丙醇的作用）的冻存盒的话应该就没有问题！1 L3 ~& S) y0 ~% u/ M
相关的注意事项其实和培养细胞没什么太大的区别！
如果一直放在-80不转入液氮管冻存的话，时间久了细胞也会死亡的！

作者: jiays 时间: 2011-4-19 16:58

都冻死了7 P8 \; x5 C p3 G

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