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标题: 如何提高细胞消化后的活度，请大虾们指教 [打印本页]

作者: luoye1986 时间: 2011-4-21 15:31 标题: 如何提高细胞消化后的活度，请大虾们指教

我培养的间充质细胞生长状态良好，增殖速度也正常，但是在用胰酶消化后其活度大大降低，请教大侠们是什么原因，有什么好的改进方法吗？谢谢！！

作者: HMC 时间: 2011-4-21 15:50

看看你的胰酶浓度是否过大，或消化时间过长

作者: luoye1986 时间: 2011-4-21 16:13

回复 HMC 的帖子. d2 M9 A$ X. M$ l& ]/ ^, x

胰酶0.25%，3分钟左右吧

作者: tigerfish 时间: 2011-4-21 16:47

减少消化时间，一般用3分钟就够了，建议每隔一分钟在显微镜下面观察一下
另外使用量也是，比如我T75一般用3ml，T175一般用7ml，只要保证能完全覆盖细胞附着表面就行了。3 m' S8 c8 T8 h; z0 Q4 x8 |
消化完之后要用大量的带FBS的培养液中和trypsin，我一般用12ml的培养液中和3ml的trypsin
另外有时候细胞几乎已经被消化了，只是还有些粘着，你只需要轻拍培养皿侧面就可以把细胞震落下来。
另外就是换用invitrogen的TrypLE™ Express,比trypsin EDTA性质更温和，效率更高。

作者: wzx6660 时间: 2011-4-21 17:08

学习了

作者: zhangyan813 时间: 2011-4-21 18:27

酶消化最重要的两个影响因素就是：作用时间和作用力度。我建议你一是减少作用时间，加了酶之后每隔1分钟就在显微镜下观察一下细胞的情况，如果大部分贴壁细胞已经变圆，就应该立即终止作用时间，有的细胞这个时间可能仅需要1分钟；另一点很重要的就是在操作过程中一定要注意你的手法，千万要温柔，将终止酶消化作用的细胞轻轻的吸起来，轻轻的吹下去，这样反复吹打几次，基本上就可以把所有的细胞都收集到，而又不至于影响细胞的活力和活性。

作者: HMC 时间: 2011-4-21 19:19

最好使用较低浓度胰酶，比如0.05%，这样会大大减轻酶对细胞的损伤

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