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标题: 为啥这次消化那么久 [打印本页]

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-23 09:38 标题: 为啥这次消化那么久

本帖最后由 xiao6tao 于 2011-4-23 09:47 编辑 $ L! A1 F" j8 X( `: ]

一直觉得我的p4MSC形态有些怪异，昨晚用100×20cm大皿消化传代，以前加1ml0.25%胰酶（含EDTA)最多消化2min，昨天晚上刚开始加1ml胰酶，2min的时候基本没什么反应，然后又补充了1ml，过了几分钟后消化很慢，差不多等了30min左右。然后我又试了下同代数的P4，基本也是消化很久。因为这个胰酶我再消化这代细胞之前消化过别的细胞很正常。所以不会是胰酶的问题。大家碰到过这样的事情吗？为什么这次会出现这么长时间呢？请大家给点意见。还有我的培养皿中总是出现下图的东西，不知道是什么东西

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-23 09:51

这是每次培养皿中都会出现的东西，一直不晓得是什么东西

作者: HMC 时间: 2011-4-23 10:52

你用PBS洗过没有，还有，细胞是否老化

作者: 飞翔的十字架 时间: 2011-4-23 15:04

这两张照片的情况我也是经常看见的
首先你的P4细胞状态肯定是发生变化了，我一般说他们是张牙舞爪的，究竟是老化还是分化我也不能确定但基本上不能实验了2 }" J' X d% x5 G" ~7 \! H
下面的照片应该考虑死细胞残骸或细胞分泌的基质，你可以传代再看看

作者: yangpan521 时间: 2011-4-23 19:58

消化不下来会不会是细胞已经老化或者是死掉啊？也可能是胰酶污染了，我也遇到过这种情况，一同学用自己的胰酶怎么就消化不掉细胞，换成别人胰酶就立马消化掉了，还有第二张图片可能是没拍好吧，也就是说你没调好视野，

作者: linchee 时间: 2011-4-24 09:30

应该是洗的不充分吧

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-24 12:28

回复 HMC 的帖子

洗过PBS 两次，和以前一样的消化，

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-24 12:32

回复飞翔的十字架的帖子- X$ G4 o: x4 V3 {

怎么区分是分化还是衰老？晓得衰老的形态但是一到镜子下面都不晓得什么是什么了。第二张的图片基本每个皿中，每一代都有。

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-24 12:34

回复 yangpan521 的帖子" U8 D! m& d V& I
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首先胰酶同样消化别的细胞挺好，不会失效也不会污染。第二张的东西是不和细胞一个层面，一直搞不清什么东西

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-4-24 13:31

可能是细胞的状态的问题，原来我也遇见过这样的问题，是细胞老的原因吧……

作者: Learner 时间: 2011-4-24 17:37

我也碰到过类似的问题，UBC-MSC和WJ-MSC都有过类似情况，不知道是不是培养基的问题。我可以肯定我的胰酶没有问题。

作者: kqyy 时间: 2011-4-24 18:55

个人意见： H0 [1 F% y& G3 ^5 y6 o7 F' g9 J
1：消化液的问题。
2：没有用PBS冲洗。
3：细胞老化了，但是照样可以消化。
4：你可以在消化液中加点EDTA，效果很好，一般消化时间在一分钟。

作者: kqyy 时间: 2011-4-24 18:55

个人意见：6 h [, b1 O8 ]% k( q+ t7 t" Z* B9 i
1：消化液的问题。1 i' ~6 G2 P. k7 E0 }7 P
2：没有用PBS冲洗。
3：细胞老化了，但是照样可以消化。
4：你可以在消化液中加点EDTA，效果很好，一般消化时间在一分钟。

作者: 清影 时间: 2011-4-25 09:03

回复 xiao6tao 的帖子; E. v+ n+ \3 b

哦，消化之前有没有用PBS清洗，若清洗了有可能是胰酶问题……
亮色的小点可能是细胞裂解或死亡后的细胞器……不放心的话你可以做一个全面的微生物检测和流式检测

作者: 柏林小杨 时间: 2011-4-25 09:26

第二个图片看起来好像视野没调好。

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-4-25 09:57

MSC细胞消化很容易，你的培养皿是否包被过？

作者: xiao6tao 时间: 2011-4-25 12:50

没有谢谢大家给的意见。今天和导师谈了这个事情，老板说可能是部分细胞开始衰老分泌的一些粘附素或者其他因子使其紧紧贴在培养皿上

作者: franty 时间: 2011-4-28 17:00

那种东西不会是培养皿表面不够平滑，透过显微镜看到的吧，我用培养瓶有时候也会看到类似的东西，问师姐，说是瓶子上的，跟细胞不在一个平面。

作者: cortex 时间: 2011-4-28 17:27

统同意楼上所说的，可能是培养皿的问题，不妨再仔细检查检查。

作者: bulu123 时间: 2011-5-3 21:53

第二张图片是对焦不准，是培养瓶上的东西，或者是细胞从培养箱难出来后，在培养瓶上挂的水蒸气

作者: osterix 时间: 2011-5-4 01:01

是不是有血清残留呀？一般消化不会查过5min，在EDTA存在下，应该更快的。建议你丢弃这组细胞吧。下面图是不是平皿表面污染了，脏了等情况

作者: almasun97184 时间: 2011-5-4 10:07

P4的MSC还很年轻啊，正常的MSC养个几十代都不成问题。看图片也不像是老化的细胞。
还是查找一下胰酶的问题吧。$ R1 o2 {# l% `+ Z, ~ v( _% f
有没有用PBS洗？胰酶有没有复温至37度或室温？胰酶是不是曾经在室温或37度放久了以至于失效？你用这管胰酶消化过其它细胞显示正常是多久以前？
还有就是MSC最好不要长得太密才传代。

作者: cheese 时间: 2011-5-4 19:55

我觉的第二个图是培养皿的问题，我养的细胞也常出现这个现象

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