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做做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？
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作者:
sidalin301
时间:
2011-4-23 20:16
标题:
做做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？
做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？
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大部分人都说石蜡切片好，可我看到好多外文文献都是用的冰冻切片，到底哪个好一些？
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本人要做背根神经节、脊髓、脑干和大脑的免疫组化，现在正处于抉择阶段，请有经验的专家给些建议，多谢了！
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作者:
zhangyan813
时间:
2011-4-23 21:52
我建议你做冰冻切片，我刚做了大鼠睾丸的冰冻切片，效果很好，给你以下建议：
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1. 做冰冻切片最关键的是固定和脱水。你也可以提前灌注固定，这样对于大脑组织可能更好一点。我用的是10%，15%和18%的蔗糖溶液做的脱水，一开始脱水1个小时，效果很不好，后来减少到40分钟，效果就好很多了。你可以根据你的样品的年龄、大小等再试条件。
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2. 载玻片一定要用多聚赖氨酸处理后才好用。现在试剂公司有处理好的片子买，直接买一包回来做就可以了，很方便的。
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3. 抗体的浓度要比直接作用于细胞的浓度要大一些，这样做出来的免疫组化才好看。
作者:
sheepthief
时间:
2011-4-23 22:35
本帖最后由 sheepthief 于 2011-4-23 22:37 编辑
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石蜡切片对于其他组织比较好，但对于脑和脊髓等组织还是做冰冻切片比较好，因为石蜡切片细胞和组织缩水都比较严重，脑和脊髓等含水量多的组织作石蜡切片会导致细胞严重变形，影响观察。
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一般建议选大鼠，经水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉满意后，立即用0.9% 盐水及4%多聚甲醛进行灌注，灌注完毕后取出脊髓及大脑，将其置入含4% 多聚甲醛液中后固定24 h(4 ℃)，转入30%蔗糖溶液中脱水72～76 h(4 ℃)，0.01 mol/L、pH7.3 PBS清洗后，将脊髓和大脑组织分别使用冰冻包埋剂包埋，冰冻切片机行横向脊髓及大脑组织切片，片厚16 μm，贴在涂有多聚赖氨酸的载玻片上，-20 ℃冻存备用。
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我不是专业的，但是和同学做过玩
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:18
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zhangyan813
的帖子
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# B5 R: V+ {5 a4 x3 v; ^
多谢指点！感激万分！
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:18
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sheepthief
的帖子
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) C8 Z# w( h! I- V/ z' y
多谢指点！感激万分！
作者:
gqs2872022
时间:
2011-4-24 09:20
国外的一般都做冰冻切片，但是理论上来说，石蜡切片的细胞形态比冰冻切片的要好很多，
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特别是在组化上，需要更清晰的形态分布。冰冻切片的话就视技术员的技术好坏而定，高手的话基本和石蜡没多大区别，但技术不好的话，对细胞核/浆还是有影响的。另外就是，还容易产生冰晶导致切的不好，所以一定要做冰冻切片的话，用梯度蔗糖平衡很重要，另外就是冷冻前要把液体吸干。
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还有就是，冰冻的组化背景还是偏高，之前我看到的发NATURE等一些的文章，虽然抗体着色好，但其背景颜色较高，用病理的专业评判就是不合格的片子，偏偏人家也能发NATURE，要是换成你我，估计人家是不予理会的。所以组化还得好好做，冰冻片子多切一些或者切剩的标本保存起来不要扔掉了。
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好好努力吧，个人认为，选哪种方法都关系不大。关键是把组织处理好，把组化做好！
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:24
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gqs2872022
的帖子
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你能不能说的具体一点？像上面2位说的那样，把自己的经验传授一些，感觉你说的都是大话空话！
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:27
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sheepthief
的帖子
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再问一下，固定脱水好之后的组织如果不急于做切片该怎么保存？
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:28
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sheepthief
的帖子
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再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:28
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zhangyan813
的帖子
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再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-24 09:29
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gqs2872022
的帖子
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再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？
作者:
zhangyan813
时间:
2011-4-24 21:20
直接液氮冻存就可以啦。但是根据我的经验，液氮也不能冻太长时间，尽快做。
作者:
sidalin301
时间:
2011-4-25 16:15
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zhangyan813
的帖子
4 f% s% I( D% L# h0 m
5 T: e- |0 O& B& l" C
谢谢了!
作者:
王乾
时间:
2011-4-26 14:43
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
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2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
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3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
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4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
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5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
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作者:
aoppolle
时间:
2011-5-3 15:17
免疫组化得话建议做石蜡切片，但是冰冻切片也可以。免疫荧光的话冰冻切片要比石蜡切片好
作者:
sidalin301
时间:
2011-5-9 14:07
谢谢
作者:
zorro
时间:
2011-8-22 18:43
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zhangyan813
的帖子
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请问你有那样的protocol吗 包括试剂公司什么的
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作者:
8231946
时间:
2011-10-21 10:03
石蜡切片观察形态比较好，而冰冻切边主要是为了染色
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