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标题: 大家分选肿瘤干细胞都用什么方法？ [打印本页]

作者: amosummer 时间: 2011-4-27 09:19 标题: 大家分选肿瘤干细胞都用什么方法？

想知道大家都用什么样的分选方法来分选肿瘤干细胞或其他干细胞！

作者: amosummer 时间: 2011-4-27 10:35

大家快投票啊！

作者: mayansen1314 时间: 2011-4-27 10:44

感觉还是流式更好用一些

作者: shen_coco 时间: 2011-4-28 00:32

第三个选项，悬浮培养富集干细胞

作者: lifeida 时间: 2011-5-12 21:48

想问一下，用流式分选细胞效率高吗？纯度高吗？会不会还有其他杂细胞？

作者: jamquit 时间: 2011-5-12 23:01

前几天刚用流式分选了细胞之前没有富集直接去选的含量很低加上细胞代数高比较老了可能也会有一定的影响这次选出来的细胞很少无血清培养后细胞很快分化了= = 虽然算是做了无用功不过至少有了一点经验。。。自我安慰啊T T- q# G3 [+ J: F9 w' K
（关于细胞代数对肝细胞分选的含量的影响我记得之前有个帖子，当时我认为既然干细胞是保持肿瘤的发生发展分化等的重要的细胞，代数高低影响应该不大。可是这次选了之后，很疑惑，觉得应该还是有一定的影响。。。希望有高手能够指点下。。。）

作者: hub12333 时间: 2011-5-13 09:02

我主意还是用干细胞标记物标记后，用流式分选

作者: leisong12 时间: 2011-5-13 09:38

用流式分选可靠一点，当时就能验证分选效果，就是不知对细胞损伤大不大。磁珠分选也行，操作麻烦一点，效果也不好评判。

作者: shen_coco 时间: 2011-5-13 18:53

你们实验室的都有流式分选的机器吗？我们实验室只能测流式，不能分选，好烦啊

作者: 新疆八钢 时间: 2011-6-5 00:58

用流式分选细胞有两种方法：细胞标志物分选法及SP分选法，看你研究的细胞有无明确的细胞标志物或你研究的目的了。无论那种分选法，目前的技术条件还无法达到100%纯度，这需要在试验中加以分析，避免假象的发生。

作者: hanjiong 时间: 2011-11-10 13:38

我也是先标记marker分子再用流式分选

作者: cneagle66 时间: 2011-11-17 13:19

没有用过流式分选。不过据别人告诉我，流式分选出来的细胞活性较差，而且对流式仪要求高，过去那些有分选功能的流式速度太慢，效率低。用磁式分离效果好，细胞活性好，纯度高，但是比较繁琐。磁式分选至少一般实验室都可以配备得起。

作者: shandazlj 时间: 2011-12-9 21:56

难道没有人做药物筛选的吗？

作者: 细胞海洋 时间: 2011-12-10 00:27

回复 shandazlj 的帖子
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作者: gandanxiaoyang 时间: 2011-12-12 09:35

个人认为，两种方法各有利弊。流式分选，细胞纯度高，但得到的细胞活力稍差，比较耗时，适合于对纯度要求较高和比较精确的实验。
而磁珠分选，可以一次分选大量细胞，而且两次分选后纯度也可达到80-90%，对于普通实验和需要大量细胞的实验，也是很好的选择。

作者: 新世纪新概念 时间: 2012-1-13 12:07

我准备做子宫内膜癌干细胞相关课题，初步设计为先提取CSC，再研究CSC与EMT及耐药相关的课题，如果按楼上的意思用流式分选效果比较好是吗

作者: mbpsky 时间: 2012-3-10 22:15

看什么肿瘤咯，细胞表面标志明显明确的话先磁珠分选了，然后分别扩增培养再次流式验证

作者: lamoon 时间: 2012-3-18 18:24

我打算先用磁珠阴性分选以后，再上流式进行标志物的阳选

作者: hub12333 时间: 2012-4-23 11:05

我一般用mark标记后，用流式分选，这个感觉操作些

作者: jack0811 时间: 2012-4-23 17:02

我们主要是先球囊富集然后流式分选

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-4-26 11:56

本帖最后由加拿大STEMCELL 于 2012-4-26 12:03 编辑 1 g$ ?( [' N2 f- b+ ^ w& C7 @" e
1 f" T; R0 k4 d
我们觉得用流式的纯度更高些，但是用磁珠分选的话，细胞存活率比流式的高得多。其实可以先用磁珠分选预富集细胞，然后再用流式，这样可以节省很多时间和精力。可以用磁珠分选或RosetteSep免疫细胞分选预富集细胞。RosetteSep不需要磁极或其他仪器，可以通过密度梯度离心从全血中预富集循环肿瘤细胞，纯度可以达到80%。
5 }# d; g; ?% T% K
循环肿瘤细胞分选：http://www.stemcell.com/en/Produ ... campaign=forumreply5 }3 n% E; K7 Z0 E& M `2 s
0 {$ }; t2 _8 w" e' {6 U
如果是分选白血病干细胞或乳腺癌干细胞（这两种干细胞高表达乙醛脱氢酶），那就可以用流式和ALDEFLUOR分析。ALDEFLUOR是一种鉴定ALDH活性细胞的非免疫性分析，可以结合免疫表型分析以增强细胞的敏感性。, R6 a: \9 E. I5 P

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作者: wagumaxida 时间: 2012-5-2 21:45

主要是流式，然后用特殊的培养基进行筛选培养

作者: wagumaxida 时间: 2012-5-2 21:46

主要是流式，然后用特殊的培养基进行筛选培养

作者: littlenwn 时间: 2012-7-10 14:29

回复 shen_coco 的帖子2 x+ f i" o0 \

同意！！

作者: 岩上石 时间: 2012-8-6 08:20

各有利弊呀

作者: flowguo 时间: 2012-8-12 13:03

也有人两种方法结合起来，先用磁珠粗筛富集，然后过流式。

作者: mike19840320 时间: 2012-10-7 09:44

流式分选出来之后，因为肿瘤干细胞的不对称分裂特性，所以在以后的传代过程中，干细胞比例会越来越少。悬浮培养成球法分选出的细胞在小鼠成瘤实验时结果不理想，纠结。

作者: wyeric 时间: 2012-10-7 12:41

jamquit 发表于 2011-5-12 23:01 : z ^/ t/ h) e( f3 q6 a
前几天刚用流式分选了细胞之前没有富集直接去选的含量很低加上细胞代数高比较老了可能也会有一定的影响 ...

流式分选貌似成本很高，你们实验室是什么机器

作者: flowguo 时间: 2012-10-10 13:40

看很多人对流式分选和磁珠分选的优缺点都不是很了解，我以前在其他流式论坛里发过贴专门讨论比较了一下，现在转过来，供大家讨论学习：

简单说一下原理：: `4 g  b) \. F' D+ V
   现在流式分选一般都是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。8 U5 p% x6 |/ K' I8 `
   磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞过柱子（柱子周围连磁铁），带磁珠的细胞就留在柱子上，不带磁珠的细胞就流走了，从而实现分选。

现在可以比较不同了：
   1、对细胞的刺激。我觉得磁珠分选最大的优势就是对细胞的刺激要小一点。因为流式分选细胞首先要经过几十微米的喷嘴，然后要被充电，还要经过几千伏的电场，最后以几十米每秒的速度落到收集管里面，有些原代细胞就受不了，分选免疫细胞也要考虑细胞活化的影响；而磁珠分选相对来说就对细胞没什么刺激。- O5 e7 L1 u3 g
   2、设备要求。磁珠分选小的实验室就能做，买一些专用的磁铁和柱子就可以了，而流式分选就需要分选型的流式细胞仪，都是几百万以上的。对操作员的要求来说，流式分选也要高一点，需要专门培训，需要注意的细节也要多很多。
当然如果你周围有什么流式平台的话，磁珠分选和流式分选的成本应该是差不多的，流式分选一次大约1-2千（各地方不同），磁珠分选的柱子磁珠差不多也要烧这么多钱。2 D. H4 h1 x5 b5 d
   3、试剂不同。这个最好理解，流式分选用的是荧光素偶联的抗体，磁珠分选用的是磁珠结合的抗体。
" S$ u0 {" u6 Q
下面就要说下流式分选的优势了：
   4、分选纯度。这个肯定是流式分选的纯度高，磁珠分选如果操作好的话也能达到80-90%的纯度，但流式分选一般都能达到90％以上（样本制备和仪器条件正常的条件下）。
   5、多参数分选。流式细胞术很大的优势就是多参数，比如我可以分选CD4+CD25+CD127low的Treg，三色的一次就能分选。磁珠分选就必须先分CD4，再分CD25，更多参数的就没法进行。
   6、低表达群细胞分选。比如有些干细胞它的表达比例只有百分之零点几，比例太少磁珠分选无法操作，流式就可以把这些细胞富集起来。; r0 V6 Q, b: K0 A
   7、胞内荧光分选。流式分选在分子生物学中很大一部分应用就是分选GFP、YFP等阳性细胞，还有可以用Hoechst染精子的单倍体进行分选，这些针对胞内成分的分选也是磁珠分选无法实现的。

   另外要说明的是，现在都很流行磁珠分选和流式分选相结合的方法，像上面举的例子分选CD4+CD25+CD127low的Treg，如果仅用流式分选可能时间太长，纯度也有影响。那么可以选择先用磁珠纯化出CD4阳性的细胞，再过流式分选CD4+CD25+CD127low的群体，这样既节省了时间保证了活性，也可以提高分选的纯度。7 j& y( Q& u* y# b" ?1 ^  H! d

作者: mike19840320 时间: 2013-1-10 13:06

ALDH1是在细胞浆内表达，经过ALDEFLUOR鉴定后的ALDH1阳性细胞能否用于后续试验？？？

作者: yehaizi 时间: 2013-6-21 16:12

我目前用的就是流式分选，虽然对细胞事先富集了一下，但分选的效果还是不好，比例太低，获得的细胞数目少了，没法进行后面的实验了

作者: 675548560 时间: 2013-6-21 19:27

非常的新手

作者: wangzegen 时间: 2013-7-9 18:00

flowguo 发表于 2012-10-10 13:40 6 ~* V7 V% s& Z8 u0 J
看很多人对流式分选和磁珠分选的优缺点都不是很了解，我以前在其他流式论坛里发过贴专门讨论比较了一下，现 ...

' U! C/ S4 p- [9 E- K, A; n) g |
你好，你发表的内容很有意义。我现在也准备做肿瘤干细胞。我觉得直接用流式或磁珠分选、，需要的样本量很大，如果我先用球囊培养的方法富集，然后用磁珠分选，再用流式进行分析分选的纯度是否可行。还有一半做肿瘤干细胞，纯度达到多少才能进行体内、体外的实验分析。

作者: April-ming 时间: 2014-4-9 21:19

回复 hub12333 的帖子9 ]+ u' {( c7 A/ e

前辈好，我是刚接触肿瘤干细胞的，现在做流式分选，想请教你用的是什么标记物，还有好多文献里说的一抗二抗是什么意思。。。。问题比较菜鸟。。。多多指教，不胜感激。

作者: wlxtldt@126.com 时间: 2014-4-21 16:40

分选之后就是养不好啊

作者: 我爱吃水果 时间: 2014-9-19 23:01

我们用的是磁珠分选，细胞活力还行（用细胞系）。主要还是纯度问题，总与期望的相差太大。

作者: scarletkiki 时间: 2015-3-16 16:41

如果有干细胞的特殊标志物，我觉得免疫磁珠要容易操作一些，虽然流式可能纯度更高，不过干细胞做分选，各种条件如细胞状态，本身干细胞所占比例等等，发生问题的概率可能会高点

作者: hottodeath 时间: 2015-4-16 12:27

用流式分选后的细胞还可以做进一步的处理么，比如转染，分选出的干细胞继续培养的话应该还会分化，而且都说经分选后的细胞状态会不怎么好。。。

作者: telomerase 时间: 2016-5-17 11:17

先磁珠后流式
先粗分，后细分。省时间，细胞成活率高

作者: eason000 时间: 2016-6-29 15:43

个人倾向于表面因子标记后用FACS，就是在保证细胞活率方面想请教一下论坛里的高手，希望不吝赐教！

作者: 细胞海洋 时间: 2016-7-1 14:18

回复 eason000 的帖子9 N/ n" S' I0 j; M- O( g

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