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标题: 大家教我一下组织贴块法的秘诀吧？ [打印本页]

作者: mbpsky 时间: 2011-5-2 19:27 标题: 大家教我一下组织贴块法的秘诀吧？

上周我做皮肤组织贴块法。直接洗净剪碎至1mmx1mm，未消化，直接种在90mm培养皿中，间隔0.5cm。在培养箱孵育了1hour后补充加了4ml.当时已经贴住了。但五一假期之后发现部分组织块浮起来来，也未爬出细胞。高手指点迷经。

作者: HMC 时间: 2011-5-3 08:18

呵呵，这个方法本来对于皮肤组织块就不保险，建议使用培养瓶培养或酶消化方法

作者: hxf_86 时间: 2011-5-3 11:00

如果你坚持用组织块法，我倒是有2个建议的方法：4 ~8 h4 E9 U. k
1、铺胶。matrix胶或者明胶，可以让细胞和组织块贴得更牢
2、用玻璃片把组织块压住。当然，玻璃片要经过很严格的消毒的

作者: mbpsky 时间: 2011-5-3 13:35

回复 HMC 的帖子
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这位兄台，我是在做组织贴块法哦，不是酶消化法。

作者: mbpsky 时间: 2011-5-3 13:37

回复 hxf_86 的帖子
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哦，有没有技术上的好办法而不是改进材料或者增加实验难度和其他耗材的消耗量的方法呢

作者: HMC 时间: 2011-5-3 13:41

好办法就是你技术上要严谨，少加液体，尽量不要频繁移动

作者: mbpsky 时间: 2011-5-3 13:44

回复 HMC 的帖子0 v6 h9 G. _! `% u8 G: O; o
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哦，这是个注意点。在时间上和其他细节方面有没有要强调的？比如多长时间加液啊，什么时候首次换液啊

作者: HMC 时间: 2011-5-3 13:55

本帖最后由 HMC 于 2011-5-3 13:55 编辑
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其实没有必要经常换液，可以根据液体代谢情况进行换液

作者: yxwfly 时间: 2011-5-3 14:15

估计贴壁的时间太短了，贴的不结实，建议延长到4-5个小时。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-5-3 14:39

组织块贴壁法，最好是培养瓶培养，过夜后加液，但是要在贴壁后倒置的瓶底加一些液体以防干燥

作者: osterix 时间: 2011-5-4 01:04

采用倒扣法，将组织切成小块了，加入一点血清，不要先加培养基，翻转倒扣，在下面添加一点培养基，保证瓶内湿润作用。待一定时间后，在翻转过来，就好了

作者: xuehu20 时间: 2011-5-4 08:51

将组织块剪碎，越小越好，用移液管将组织块平铺培养瓶底，翻转倒扣培养箱中，第二天添加培养基并将培养瓶翻转过来，1周内不能碰触培养瓶

作者: biovictor 时间: 2011-5-4 11:06

我觉得不铺胶的话，最好加培养基少一点儿，类似于悬滴培养，等到有细胞迁出后再添加培养基，这是关键！另外如果条件容许还是铺胶过夜最好。

作者: jhu132llh 时间: 2011-5-4 11:34

组织培养的最简单的方法就是把组织块均匀的放置在培养瓶底，培养上5-10分钟，然后将培养瓶反过来培养上30-60分钟后在加培养液培养
开始的时候可以加一半的培养液，然后换液勤快点并且换液的时候用倾斜轻轻吸走和加入培养液
等组织开始游离细胞并且完成贴覆后可以正常培养液量正常培养

作者: woophone 时间: 2011-7-10 13:35

我做过皮下脂肪的贴块法，物理剪碎至1mm*1mm的组织块，其实越小越好。我用小枪头吸取，贴在干净的培养皿底，再倒置于孵箱中，孵育2小时左右，基本贴得很牢固了。再加入培养基，切记小心，不要把刚贴上去的组织块冲下来，让后轻微晃动，再正置于孵箱中孵育一天，24小时后基本就有很多细胞爬出来了。视情况加培养基或者换液，拟或加一些三抗。

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