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标题: 各种诱导iPS方法 [打印本页]

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:17 标题: 各种诱导iPS方法

Cell Stem Cell：利用重组蛋白诱导iPS细胞成功, y+ N" Q# w; j- N9 h% N% Z$ q9 v

Cloning and Stem Cells：通过控制培养条件可激发体细胞的干细胞特性

Science：不含外来DNA的人类iPS细胞
- @# T# Z0 _$ R. g
Nature：不使用病毒载体生成人iPS细胞系的方法
* E' ?4 w9 B2 _ E2 P
Cell Stem Cell：化学小分子可替代基因诱导iPS细胞3 x$ b1 g0 `% K. L8 }

Cell：利用单基因调控诱导iPS/ a, M! T1 Z6 O+ f. S- @

补充内容 (2011-5-4 12:37):5 S" }- z' C8 Y& C
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用

补充内容 (2011-5-4 12:45):
Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:18

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8 Z0 \+ v, o; c
Cell Stem Cell：利用重组蛋白诱导iPS细胞成功3 D* D, d* G7 k4 ?! Z' I1 M
美国Scripps研究所，ProteomTech 公司，和德国马克斯普朗克分子生物医学研究所等机构的科研人员成功地利用重组蛋白诱导体细胞生成多能干细胞。较之传统的依赖于病毒载体的诱变方法，这一划时代的新方法无需使用任何形式的外源性遗传物质，从而消除了传统方法中不可避免的对靶细胞自身基因组的影响，而且更加简便快捷。这项成果已经在最近一期的"细胞·干细胞"期刊发表，并立即引起了包括华尔街日报,NBC和福布斯等在内的各大媒体的广泛关注。6 w7 T. x% N" E: h% z5 N6 M
5 ~# ~( G, r2 d, r& P1 l) [
人类医学发展到今天, 对某些疑难疾病还是不能彻底根治, 如遗传疾病，器官坏死，和糖尿病等。这些疾病仅靠药物治疗只能减缓症状，而器官移植又受捐赠器官有限和免疫排斥等因素的限制而不能推广。干细胞是唯一有可能攻克这些疾病的治疗手段。但长期以来，获取多能干细胞(pluripotent stem cell)的主要来源为人的胚胎。这引起道德和宗教的争议，进而在美国等国家受到法律限制。另外，用异己的胚胎干细胞发展的治疗手段将来还是会遇到免疫排斥的问题。8 B) {9 u) q( V, F2 p% a+ |  M. C

2006年，日本科学家Shinya Yamanaka领导的实验室第一次证明，通过以反转录病毒为载体转基因表达四个转录因子，可以将小鼠或人的体细胞转变为与胚胎干细胞拥有相似分化和繁殖能力的细胞，命名为诱导性干细胞（iPS）。这一成果具有划时代的意义：1）干细胞的产生可以不再需要破坏胚胎，避免了道德，宗教和法律上的限制；2）不同疾病的诱导性干细胞可衍生出不同类型的疾病模型，为基础研究和药物筛选提供了强大的武器；3）理论上，各种疑难疾病可以通过病人自己的体细胞转变为干细胞，再分化为各种类型的细胞，组织，甚至器官，经过或不经过体外加工后，放回病人体内，治愈疾病。
) m5 m, ]/ i' y
在本论文中，研究人员成功地用四个转录因子的蛋白完成了由体细胞到诱导性干细胞的转变过程。自始至终，细胞的遗传信息没有受到任何影响。蛋白诱导性干细胞的重大意义包括：1）安全性：转化过程没有使用病毒，没有使用基因，没有任何改变细胞遗传信息的风险；2）普及性：蛋白诱导方法远比基因诱导方法简单易行。这样一来，iPS技术不再被几个资深实验室所垄断。大部分实验室都可以重复蛋白方法而获得iPS。也就是说，蛋白诱导方法大大降低了iPS领域的"门坎"。3）可行性：由于该方法的简单易行，重复性强，它可以被扩大化，产业化，进而被商业化。蛋白诱导干细胞方法将大大降低利用干细胞对病人"量身定做"的治疗手段的成本，使得这一商业模式成为可能。
* q- ^: J" \+ M1 \; N4 k& |
如果说，Shinya Yamanaka博士的成果第一次使人类看到了一个梦想，那么这篇论文的发表标志着我们从梦想向现实跨出了关键的一大步。! i1 [2 O  e' a% R9 M1 z* w% j
Cell Stem Cell, 23 April 2009 doi:10.1016/j.stem.2009.04.0054 F1 E4 r9 y6 _6 z+ l+ ~

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using Recombinant Proteins( o/ J" ]$ y/ ]  Z# y
' @% o9 V* p0 L" N, w
Hongyan Zhou1,Shili Wu4,7,Jin Young Joo5,7,Saiyong Zhu1,Dong Wook Han5,Tongxiang Lin1,Sunia Trauger2,3,Geoffery Bien4,Susan Yao4,Yong Zhu4,Gary Siuzdak2,3,Hans R. Sch?ler5,Lingxun Duan6andSheng Ding1,,

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:20

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3 R( t' a" R4 G# d
Cloning and Stem Cells：通过控制培养条件可激发体细胞的干细胞特性7 }$ s3 \6 j$ H5 _! \3 P- @
美国研究人员发现了一种打开人体成纤维细胞（皮肤细胞）中的干细胞基因的新方法，从而避免了插入额外基因或利用病毒所带来的健康风险。这一成果开辟了细胞重组的新途径，未来通过诱使患者自身细胞修复和再生受损组织，该方法将可用于治疗一系列人类疾病和创伤。

在7月21日的《克隆与干细胞》期刊的网络版上，美国伍斯特理工学院和CellThera公司的研究人员描述了此项研究成果。研究人员表示，只需通过操纵培养条件，他们就可获得成纤维细胞的变化，这将有利于开发出病人特异性细胞疗法。5 f: V1 T- o9 A" [6 i' W8 e: u5 A/ m
, P) `0 g4 k! z6 g5 H" z( p' F( n7 D
新兴的再生医学领域初期的研究重点是多能胚胎干细胞。在多能态，已知某些基因呈活跃状态，有助于控制干细胞。包括OCT4、SOX2和NANOG在内的这些基因在干细胞中很活跃，但干细胞一旦开始分化并沿此途径发展成为某种特定细胞类型和组织时，这些基因就变成休眠状态，故而这些基因被认定为多能的标志物。0 \: }9 w% e- h" m. y* ?( u! B

虽然胚胎干细胞研究尚在不断产生更多重要的知识，但被称为诱导多能干细胞（iPS）的重组细胞可用于再生组织，同时可避免使用胚胎干细胞带来的一些问题，如伦理问题、胚胎干细胞有可能被患者免疫系统排斥的问题或是生长失控导致癌症的问题等。
- |0 k9 U- D7 g
2007年，日本京都大学山中伸弥团队率先研制出iPS细胞，在人体皮肤细胞中插入了包括OCT4和SOX2在内的4个额外的干细胞基因。这些基因开始表达出能将皮肤细胞变回更加多能状态的蛋白质。这项技术已在实验室中被重复验证，而且已可实现用更少的添加基因来进行重组，这曾是一个重大的科学突破。但其在人类疾病治疗方面的潜力是有限的，因为将新基因插入到成体细胞，或通过病毒来携带这些遗传载荷都可能引发一系列的问题。

伍斯特理工学院此次的最新研究，则是通过降低细胞暴露的大气氧含量，及将称为成纤维细胞生长因子（FGF2）的蛋白添加到培养基中，来打开现有的、尚处于休眠状态的干细胞基因OCT4、SOX2和NANOG。FGF2是一种天然蛋白，对维持胚胎干细胞的多能性至关重要。7 J% ]* x- s6 g
2 f4 ?# W4 g3 ~6 H% A
此外，该小组发现，一旦干细胞基因被激活并开始表达蛋白，这些蛋白可迁移到皮肤细胞的细胞核中，准确得就像是发生在诱导多能干细胞中。伍斯特理工学院生物学和生物技术副教授雷蒙德·佩吉认为，这是一个令人兴奋的发现，将这些蛋白定位在细胞核中是重组这些细胞的第一步。( R6 F. R+ y _4 W6 y$ |) g
, y4 E B3 K4 B
更令研究人员惊异的是，干细胞基因OCT4、SOX2和NANOG并不像推定的那样在未经处理的皮肤细胞中是完全休眠的。事实上，这些基因会发送信息，只不过这些信息并没有被转录成可形成细胞多能性的蛋白。研究人员称，这个事实不仅迫使他们重新思考什么才是多能性的真正标志，而且也表明在调控干细胞基因表达的这些细胞中存在着一种天然机制，这为研究人员打开了一条研究细胞重组的全新思路。
Cloning and Stem Cells doi:10.1089/clo.2009.0015.( ?4 q7 ^3 m! M# o- x0 D5 C
6 g$ f6 i$ B6 a( u2 e
Induction of Stem Cell Gene Expression in Adult Human Fibroblasts without Transgenes7 h7 U% I3 i8 o/ x" s! \
7 b- O1 u% Y% a" E! P0 D
Raymond L. Page,1,2,3,4 Sakthikumar Ambady,1,2 William F. Holmes,2 Lucy Vilner,1 Denis Kole,2 Olga Kashpur,2 Victoria Huntress,2 Ina Vojtic,1 Holly Whitton,2 and Tanja Dominko1,2,4

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:20

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5 \3 s$ l+ j, W1 g
Science：不含外来DNA的人类iPS细胞/ a! ^1 Q/ a/ C( X1 \
据3月27日的《科学》杂志报道说，研究人员已经研发出了一种创制诱导人类多能干细胞（或称iPS细胞）的方法，在这些细胞中不含外来且可能有害的DNA。这些发现对在基础生物学研究中所使用的细胞来说是重要的，而且也是人们向生产iPS细胞这一目标迈出的关键性的一步。, o; y; q- H  X( Y9 [# \) v
7 {6 A. }# v  Q+ t/ ?7 H: m7 P0 K4 F
这些iPS细胞可用于医疗但却没有添加到细胞中用来重新设定细胞程序的那些物质所带来的危险。这些添加的物质可能会干扰细胞的正常发育。在研究人员首次对胎儿和成人细胞进行重新编程并使其成为iPS细胞的时候，他们是用基因工程病毒将数个关键性的基因插入到细胞核内，并通过它们来开启重新编程的过程。年轻华裔科学家俞君英为此项研究的并列通讯作者。
% b8 C! U1 Z  Q: E$ m0 F% i) B9 W
俞君英及其同僚现在介绍了另外一种方法。他们将基因添加到被称作质粒的DNA环中，而这些质粒通常存在于细胞的染色体之外。接着，研究人员用一种叫做核转染的方法将这些质粒介入到人包皮细胞中。在质粒中的基因所表达的蛋白质会将细胞重新编程并使其成为iPS细胞。这些iPS细胞在接着的几轮细胞分裂中会开始失去这些质粒，这样研究人员就可以分离出不含质粒的细胞。在文章中，作者们提到，其它的研究团队最近也报告了具有同样目标的实验方法，但是这些作者说，他们的方法才是目前唯一的显示能够产生完全不含载体和转基因序列的人类iPS细胞的方法。
Science March 26, 2009 DOI: 10.1126/science.1172482" F4 {2 G* G& w' w( P5 y
0 l/ s- }; f& p5 f- }
Human Induced Pluripotent Stem Cells Free of Vector and Transgene Sequences
3 n9 B9 v9 [" K4 b
Junying Yu 1*, Kejin Hu 2, Kim Smuga-Otto 1, Shulan Tian 3, Ron Stewart 3, Igor I. Slukvin 4, James A. Thomson 5*

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:21

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+ {9 [# o8 z9 v. E+ n- r; [
Nature：不使用病毒载体生成人iPS细胞系的方法
关于非生殖性成年细胞能够被重新编程而成为多能细胞、从而能够分化成任何细胞类型的发现，让人们看到了一些激动人心的可能性。重新编程的细胞（被称为“诱导多能干细胞”，即iPS细胞）在再生医学中应当有巨大潜力，但目前用来生成它们的方法大多数都涉及到病毒基因的使用，这有可能使所诱导的细胞发生异常。7 O Z U% a% |# Q! J% E
! G6 n, F# w$ M/ c
两个小组在本期Nature上报告了一项合作研究工作，这项工作成功地在没有使用病毒载体的情况下使人体细胞产生了多能性。研究人员利用来自病毒的2A肽序列生成一种结合重新编程因子的“多顺反子载体”（multicistronic vector），该载体被piggyBac转位子载体送入细胞中，从而在人及小鼠成纤维细胞中都生成了稳定的iPS细胞。然后，与2A结合在一起的重新编程因子（在已经生成的iPS细胞系中是不需要的）被除去。/ g. d8 f" c5 ]. w0 K7 {& L
Nature 458, 766-770 (9 April 2009) | doi:10.1038/nature07863' q; v; ^5 ?6 @9 l, i/ B Y
9 `9 @) w, H7 R
piggyBac transposition reprograms fibroblasts to induced pluripotent stem cells

Knut Woltjen1, Iacovos P. Michael1,2, Paria Mohseni1,2, Ridham Desai1,2, Maria Mileikovsky1, Riikka H?m?l?inen1, Rebecca Cowling1, Wei Wang3, Pentao Liu3, Marina Gertsenstein1, Keisuke Kaji4, Hoon-Ki Sung1 & Andras Nagy1,2

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:23

回复 hualin840518 的帖子; g0 [" ]1 e: z9 N$ x1 C4 H4 D+ Z+ ^

Cell Stem Cell：化学小分子可替代基因诱导iPS细胞
近日，哈佛大学干细胞研究所(HSCI)的科学家研究诱导的多能干细胞取得进步。该研究报告发表在10月8日Cell Stem Cell杂志网络版上。1 Z, s. k! b4 F. R/ D( Y

目前的iPS细胞研究中，将成人的皮肤细胞重编程转化为胚胎干细胞状态一般需要四个基因参与。该课题组利用一种小分子化学物质RepSox代替了其中的Sox2和 cMyc基因的功能，并且RepSox是在该实验的不同时间以不同的形式发挥功能。由于cMyc是肿瘤促进因子(tumor promoter)，利用 cMyc产生的iPS细胞不能用于人类疾病治疗，因此十分有必要寻找一种不使用cMyc基因的产生iPS细胞新方法。2 @! b# ]3 T- S5 e9 k w

找到一种安全生产iPS细胞的方法与研究胚胎干细胞具有同等重要的生物学意义。因为以患者自身细胞重编程产生的细胞在移植后理论上可以不需要使用免疫抑制药物。同样的，患者特异性的iPS细胞还能用于治疗心脏损伤或其他个性化的治疗中。
4 I( p$ }& N6 V% y
第一作者Justin K. Ichida介绍说，这项发现证实了利用某些化学药物针对某些需要做移植手术的患者产生更安全的干细胞的可行性。
Cell Stem Cell, 08 October 2009 doi:10.1016/j.stem.2009.09.012$ f6 _0 U2 W4 S* u9 C
& p/ |" L2 ~ D. L X
A Small-Molecule Inhibitor of Tgf-β Signaling Replaces Sox2 in Reprogramming by Inducing Nanog
- k% n4 ]1 z, \7 H3 {
Justin K. Ichida1, 3, 6, Joel Blanchard1, 6, Kelvin Lam1, 6, Esther Y. Son1, 2, 3, 5, 6, Julia E. Chung1, 2, 3, Dieter Egli1, 3, Kyle M. Loh1, Ava C. Carter1, 3, Francesco P. Di Giorgio1, 3, Kathryn Koszka1, 3, Danwei Huangfu1, Hidenori Akutsu4, David R. Liu5, Lee L. Rubin1, , and Kevin Eggan1, 2, 3, ,

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:24

回复 hualin840518 的帖子% Y1 Q6 u# b/ Z1 G

Cell：利用单基因调控诱导iPS# m* J4 b; L& }/ ~2 G) K% p/ v
来自马克斯·普郎克分子生物医药研究所（Max Planck Institute for Molecular Biomedicine），德国波昂大学等处的研究人员发布了一项细胞重新编程技术方面的里程碑式的研究成果：他们成功的只利用一种转录因子就能完成重新编程。这一研究成果公布杂2月6日的Cell杂志上。
* n8 L* K( s$ `+ h/ n
领导这一研究的是著名的干细胞专家Hans R. Schöler，其去年在Nature发表的文章中提出了一种将体细胞重新编程的更安全方法——将之前需要的4种因子减少为2个内生因子（Oct4 加上Klf4或c-Myc），之所以有可能这样，是因为这些神经细胞比胚胎干细胞表达更高水平的内生Sox2和c-Myc，这说明具有适当匹配的转录因子的体细胞是生成iPS细胞的一个潜在有用的起始点。

现在Schöler等人又将需要的转录因子数目减少为一个：Oct4，其研究小组将Oct4以逆转录病毒为载体插入到小鼠神经干细胞，获得了iPS细胞，这些细胞能在体外转变成神经干细胞，或者变成心肌细胞和生殖细胞。而且当研究人员将这些细胞与小鼠胚胎混和的时候，重新编程的细胞能促进生殖腺发育，并传递到下一代。虽然重新编程的成功率比Schöler用两种因子的时候要低10倍，但是这种只有一种因子的方法与用四种因子进行皮肤细胞，成纤维细胞重新编程的效果是一样的。% {. ?& s) H7 e% \ |* E. c3 l
. b6 I5 d9 h7 d8 f
来自麻省总医药的Konrad Hochedlinger教授评价这一成就“令人惊讶”，美国斯克利普斯研究院的干细胞研究人员Sheng ding则认为，这项研究表明可以利用组织特异性细胞——这些细胞能天然表达一些山中伸弥最初重新编程“工具盒”中的标记，这样能比成纤维细胞更加容易重新编程，“对于这些组织特异性祖细胞的研究十分重要”，“这将帮助我们利用最少数目的基因进行重新编程。”
* P- K6 A5 d8 U
Schöler表示，这一研究成果“让我们思考是否Oct4在其它细胞中也能诱导出多能性”，目前他们正在进行成纤维细胞这方面的研究，“去年，哈佛大学的Douglas Melton研究组发现利用一种双因子方法：Oct4和Sox2，配合一种小分子抑制剂能有效的重新编程人类成纤维细胞”，Schöler认为只用Oct4也能达到相同的目的。

Schöler的这一单因子研究去除了两个著名的致癌因子：c-Myc和Klf4，但是仍然需要可能永久修改细胞DNA的病毒：逆转录病毒作为载体，因此还是无法应用到临床，不过更少的因子也就意味着需要更少的遗传操作，并且如果Oct4能同非逆转录病毒的方面诱导，那么也许就可以完成无病毒重新编程了。" w2 d' y3 s4 O5 Z5 O$ P8 B {6 Y
3 Q% Y& h% B, p4 [
“如果能发现一种方法无需任何因子，那么这有可能就是最后一步了”，Schöler说，“这一天肯定会到来，现在只是时间问题。”
Cell, Volume 136, Issue 3, 411-419, 6 February 20092 X# w( h! l# O9 M; E

Oct4-Induced Pluripotency in Adult Neural Stem Cells
/ l9 m, N2 A: \+ z; U) K0 O
Jeong Beom Kim1,Vittorio Sebastiano1,Guangming Wu1,Marcos J. Araúzo-Bravo1,Philipp Sasse2,Luca Gentile1,Kinarm Ko1,David Ruau3,Mathias Ehrich4,Dirk van den Boom4,Johann Meyer5,Karin Hübner1,Christof Bernemann1,Claudia Ortmeier1,Martin Zenke3,Bernd K. Fleischmann2,Holm Zaehres1andHans R. Sch?ler1,,

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:24

所有文章全文正在整理中,收集完以后一起上传!

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:51

本帖最后由细胞海洋于 2012-5-8 00:02 编辑 * V3 [) V* D/ K% N% s
) X. I; ^$ B' s" X, o& k
回复 hualin840518 的帖子
! i8 ~2 w2 t0 V+ h
6篇原文全部搞定
希望对大家有用!( T( q. ?: |, G% B7 j/ _
- d5 v, y0 K F, p3 j5 x+ e
补充内容 (2011-5-5 21:44):3 M" t. D j' G8 y1 C
见第13楼，16楼
补充内容 (2011-5-4 12:37):
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用9 z& y1 ]/ T' T. U4 B' C, X# G* d

补充内容 (2011-5-4 12:45):
Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成
这两个研究的PDF全文！

作者: hualin840518 时间: 2011-5-3 12:52

回复 hualin840518 的帖子. L, H0 {- `8 n0 @7 p. K

希望大家对这个帖子继续补充完善!

作者: wys7416 时间: 2011-5-4 10:58

楼主少了个microRNA诱导iPS的形成，cell stem cell，4月9日发表的

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 12:37

回复 hualin840518 的帖子$ }8 J# e2 K2 U3 y! u3 k
* Y( A% I4 G9 u' o- c! K2 z% ^
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用
中国科学院广州生物医药与健康研究院利用锐博生物（Ribobio）的miR-RiboTM antagomir、Bulge loopTM miRNA qPCR primer产品在诱导干细胞研究中获得重要发现，在小鼠成纤细胞（MEF）中分别过表达两个miRNA cluster（106a-363簇及302-367簇）显著提高了三因子（Sox2、Klf4、Oct4）诱导iPS的诱导效率。该文章发表于最新一期的JBC杂志上。
7 G8 N1 a9 A/ q4 C0 n- N7 @8 V
该文章用锐博生物的Bulge loopTM miRNA qRT-PCR primer set 定量检测miRNA 的表达，发现两个miRNA簇在小鼠胚胎干细胞（ESC）中的表达显著高于MEF细胞；该两个miRNA簇的成员在4因子诱导的iPS细胞中的表达显著高于三因子诱导的iPS细胞。

该文章进一步用锐博生物的miRNA抑制剂miR-RiboTM antagomir分别抑制两个miRNA簇的各个成员，发现单个miRNA在提高iPS形成效率过程中发挥的作用不同（见下图）。; r, D4 A- }. P- x$ s
9 Z. ^) b. l1 j
这项研究揭示了提高iPS诱导效率的新方法，并且miRNA作为内源存在的分子，以miRNA的作用部分替代四因子中的c-Myc将有助于iPS早日进入临床应用。
" d) h; Z& F2 Q2 e7 `" R0 P2 A& _
中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿院长实验室是国内首个成功诱导iPS的实验室之一，且该实验室首次发现维生素C（Vc）可显著提高iPS的诱导效率（Cell Stem Cell，封面文章）。( o+ _- P4 ~9 G5 M' ?% b; v) d
锐博生物的siRNA、miRNA相关产品已经在国内中科院、北京大学、清华大学、复旦大学等多个科研院广泛应用，使用这些产品发表的科研论文有几百篇（SCI收录），并正在不断增长，该文章的发表又一次证明锐博生物的产品获得了国际一流生物学家的认可！) F+ G# t/ n8 E
" [/ \ n9 J4 e) t, ?
0 J0 D6 A _8 Y$ H) Q
J. Biol. Chem. 2011 IN press
Microrna cluster 302-367 enhances somatic cell reprogramming by accelerating a mesenchymal-to-epithelial transition
Baojian Liao1,2,*, Xichen Bao1,2,3,*, Longqi Liu1, Shipeng Feng3, Athanasios Zovoilis4, Wenbo Liu1, Yanting Xue1,2, Jie Cai1, Xiangpeng Guo1, Baoming Qin1, Ruosi Zhang5, Jiayan Wu5, Liangxue Lai1, Maikun Teng2, Liwen Niu2, Biliang Zhang3,&, Miguel A. Esteban1,&, Duanqing Pei1

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 12:40

回复 hualin840518 的帖子) R7 X, d) o) Y

JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用
pdf全文

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 12:51

回复 hualin840518 的帖子0 @2 i! ^5 A P2 U& f' U0 |+ ]
! u- u6 `$ h6 V* I" A9 E! |
Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成
美用miRNAs制造出诱导多功能干细胞，比利用4个转录因子的效率提高了100倍" g. w. k2 K% h! g0 O9 O# f/ s
据美国物理学家组织网4月7日报道，美国科学家首次用实验鼠的微小RNA（MicroRNAs）对很容易从皮肤活检中得到的纤维原细胞进行重新编程，制造出了诱导多功能干细胞（ iPSCs）。科学家可据此制造出特定病人的iPS细胞，以用于药物筛选和身体组织再生。相关研究发表在《细胞—干细胞》杂志上。" A& D. {* K/ y. \
负责该研究的美国宾夕法尼亚大学医学院医学、细胞和发育生物学教授兼再生医学研究所科学主管爱德华·莫里西表示，这是科学家首次未使用4个转录因子制造出iPS细胞，并将效率提高了100倍。
2006年，日本科学家山中申弥利用病毒载体将4个转录因子的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到了一种类似胚胎干细胞的细胞类型，这就是iPS细胞。随后很多科学家陆续报告称，他们使用这4个转录因子上的变异制造出了iPS细胞。 iPS细胞具有和胚胎干细胞类似的功能，却绕开了胚胎干细胞研究一直面临的伦理和法律等方面的障碍，因此，其应用前景非常广阔。2 K/ V7 g8 F0 m
从事该研究的科学家希望，有朝一日能有效制造出不同病人的干细胞以研究人类疾病；制造出一个细胞“仓库”以让人体自身的心脏、肝脏等细胞再生。尽管前景诱人，但制造出iPS细胞还面临着效率低的问题，使用人体细胞制造iPS细胞的效率尤其低下。另外，添加新基因等方法可能有导致癌症的副作用，因此，提高iPS细胞的转化效率和安全性成为近年来科学界的研究重点之一。, S; ^4 I: U4 u2 A+ X$ N/ L
以前，科学家使用转录因子让成人细胞重新编程，每使用10万个成人细胞得到的iPS细胞不足20个。而新实验中，科学家使用微小RNA来让成人细胞重新编程，结果，每使用10万个成人细胞得到的iPS细胞高达1万多个。: `. w8 a7 Y9 x( l! p2 V/ m
莫里西表示，这种方法能制造出iPS细胞让我们很吃惊，而且，其效率比山中申弥首次提出的转录因子方法高很多。至于为何在制造iPS细胞的过程中，微小RNA和4个转录因子的作用原理如此不同还需进一步的研究。" ?$ @' C; c( `. J: V+ h* B' v
莫里西实验室研发的微小RNA方法产生的iPS细胞能制造出老鼠体内几乎全部的组织，包括生殖细胞、精子和卵子等。该科研团队目前正同其他科学团队合作，试图将这些诱导多功能干细胞分化成心肌细胞、造血细胞和肝脏细胞。
莫里西表示，在用病人的样本制造iPS细胞的过程中，这种方法不仅效率高，而且可以得到更多产品。他们希望制造出人工合成的微小RNA，来将成人细胞转变为iPS细胞，最终得到包括肝脏、心肌或神经细胞等在内的各种细胞。2 Q0 L& S6 } I. k9 v
美国心肺和血液研究所的肺病研究室主管詹姆斯·基莱认为，有效制造出诱导多功能干细胞对其治疗用途至关重要，新方法朝科学家的最终目标前进了一大步，也将促进其他干细胞研究的发展。
Cell Stem Cell. 2011 Apr 8;8(4):376-88./ n# H* i+ u6 q' T+ m' j, Y* {
Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency.: ?+ g# [8 j, {, v6 V3 W
Anokye-Danso F, Trivedi CM, Juhr D, Gupta M, Cui Z, Tian Y, Zhang Y, Yang W, Gruber PJ, Epstein JA, Morrisey EE.6 h( w: r- ^. N8 Z% e# @
Source
Department of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA 19104, USA.

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 12:52

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文献导读----Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming
题目：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency
初读此题目，眼前了一亮，曾记得当初就有过表观遗传修饰获得ips的想法，如今已被实现了。
作者：不出所料，又有中国人，21世纪，生物发展看中国
期刊 cell  stem cell6 a  y" B1 x" t" L$ m4 N" j6 x
一 summary2 _' K4 l4 s7 }* g# r) V9 {! W
摘要主要介绍一下过去的研究背景，自己的研究相比以前的研究的创新性。以前是用四个转录因子oct4、sox2、klf4、myc来获得ips，现在用miR302/367,来激活OCT4，然后抑制hdac2，我们研究发现miRNA和hdac是获得ips强有力的手段。# D8 L& W. N$ P- v4 I! V* ^
1 。。。。open the way to1 x8 q+ b- O( \: R7 ^
2 we show here that expression of
3 we found that 。。。is required for/ A/ F& v5 T" g" }
4 thus our data show that 。。。pathways can cooperate in a powerful way to reprogram 。。。( |2 m2 g! A( O" r
二 introduction, z% C; _( t% F9 n. ?6 Y
1 一开始说一些象征性的话，说此领域很有前景很有意义
2 然后又说当前存在的问题，即使有些问题已经被解决了，他也说没有解决，说自己的解决了，真实太虚伪了5 S- D7 z4 Z) Q
3 说一说此前的研究，说明我的研究的研究方面的一些进展，我那是在这些研究的基础上进行的
4 吹嘘一下自己的研究发现，解决了哪些问题，证明了那些知识
1 the 。。。。。。although poweful，there are currently several limitation
2 these limitation hamper the use of8 u  ]3 l% D) |, h6 r( ~% M
3 we show that the expression
三研究结果
研究结果一本分成好几部分展开，每一部分都有先关的实验做验证得出某些结论
1 miR302/367 Reprograms Fibroblasts to an iPSC Phenotype% \- w, W: N4 U9 A9 w
首先证明两点，第一是micR02/367确实能偶诱导产生ips，第二个选用的什么载体，怎么怎证明转进去了。- k  ^: `3 `- B' n7 c, Z
（1）作者选用了含有oct4-GFP的细胞系9 e* O6 W$ X3 K# p8 K1 \
（2）作者构建了慢病毒载体，含有micR02/367，转染了这个细胞，发现了6天就能产生干细胞一样的形态克隆
（3）组着有用普通的产生ips的方法，8天了还没有产生ips: V% Y- i4 U1 a9 X/ e3 L5 n4 x' D
（4）作者检测了其他几个转录因子，发现也高表达* F: c* }. F2 N
（5）不用VPA的不能够高效产生ips
2 miR302/367 Reprogramming is More Efficient Than OSKM Reprogramming
作者要证明高效性，就要一时间为比较，这个实验没有什么
3 miR302/367 iPSCs Can Generate Derivatives of Mesoderm, Endoderm, and Ectoderm in Teratomas;Generate Adult Chimeras; and Contribute to the Mouse Germline
这个实验必须要让人信服，产生的确实是ips ，并且具有全能性，作者用了能偶注入小鼠体内产生畸胎瘤实验证明具有干细胞的特性。要证明能产生各种组织器官，选用了能偶表达半乳糖的细胞，吧ips注入胚胎内细胞团，产生嵌合体小鼠，结果证明了缺失能分化为各种组织，也包括生殖细胞
4 miR302/367 Can Reprogram Human Fibroblasts to a Pluripotent State More Efficiently Than OSKM Factors
作者首先在小鼠细胞做了实验，现在又用人体细胞做实验，证明其高效性$ v3 `8 J1 @5 h2 C# ]$ h) D! m+ a7 C
5 miR367 Expression is Required for miR302/367 iPSC Reprogramming3 u. h4 ]& q0 ^( ]  y! `
往后的实验都不是很重要了，无非要证明其精确性，证明其工作要做的完美
英语句型总结
发现了一个规律，开始的每个研究结果开始还是做一些背景的介绍，随后的几个短路就用验证的句子去写7 }7 i7 w/ b8 [* H  y$ h' q+ ~7 p/ b
1 to test this hypothesis，we3 \0 G; I' U7 ~* s5 E
2 to better qualify the increas% S/ k8 D0 g( u! `3 u* b( t
3 to test weather 。。。contribute to' T9 z  O: }- X  i+ O8 x- O
4 to assess whether  we abserverd$ w) m$ C8 e2 q- z* v
5 recent wevidence has poroverd
好的文章不仅给我们很好的启迪，写作也像是一首诗3 G2 i0 p0 n; E! X
总结4 t: W* A; U8 \: o8 a
总结要分为五个部分来写，第一部分是总结；第二部分是回顾；第三部分是把机理说说；第四部分，再说说我们的研究；第五部分要与第一部分相对应。5 X  S# M$ t' D. g/ m' N0 Q( E7 @" ?
总结一般要四五段左右，最后一段要总结我们的贡献，以及展望外来的研究趋势
1 current stragise 。。。。we show that ，，，，with ongoing advence) E! {0 R4 T. Y$ q( h! k4 M
2 previous study have demonstrate
3 our study show that! c  L( j' h% m# j+ [  i
不同的文章不同的期刊写作的风格是不太一样的，但是还是有些规律可循的

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 12:56

回复 hualin840518 的帖子

Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成
文章全文

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 13:05

回复细胞海洋的帖子* T a+ |4 p8 g9 S1 p* {3 T

我已补充了两篇关于microRNA诱导iPS的形成的文章
检索过程中发现1 [9 m$ v3 n4 L: l6 v& x; ~
其实这个论坛已经有了5 N, d9 ]; c+ g4 o
参考下面这个帖子：
http://www.stemcell8.cn/thread-37568-1-1.html
海洋注：本文跟帖中有很多不同意见本文是否存在作假可能欢迎大家参与讨论发表自己的观点
' V$ J( }8 }$ B) v5 @' m4 c8 y
我加以了总结和补充！
文献导读文献导读----Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming
和上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率的文章！

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 13:09

回复 hualin840518 的帖子$ R$ B. J- j& k; X5 }

http://www.stemcell8.cn/thread-37568-1-1.html; E/ z8 b' N9 ?# r1 E; R2 [1 w
海洋注：本文跟帖中有很多不同意见本文是否存在作假可能欢迎大家参与讨论发表自己的观点2 S: z) v$ m+ {/ [+ ]0 O/ k
Z# `1 ^; I3 s' s5 S2 t) j
当初我对这个帖子没有发表任何意见
其实我觉得这篇文章做得很好
写的也很好，很值得大家学习和拜读！

论坛markllq的观点% ]4 p, A: [" r) s
这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！
" L* K/ \8 K" W/ A
这点值得大家深思！4 F" z. j8 ]* U, C O

作者: hualin840518 时间: 2011-5-4 13:15

回复 hualin840518 的帖子6 a2 o& t' N" B( H& Y: n$ ]5 q2 e
5 F5 V; Y6 a; }' `
继续欢迎大家补充和讨论
同时也希望这个帖子能真正为做iPSc相关研究的人带来一点帮助！:):handshake

作者: fwyou 时间: 2011-5-4 21:14

哎楼主真的忒感谢虽然做的课题不是这个领域但是很相关看看! L# i! I/ A7 n" i) Q6 d6 E* n

没有好的idea 和你们交流可能困难了。。。

作者: gact 时间: 2011-5-5 17:19

这个比较不错了哈哈。。

作者: athene1102 时间: 2011-5-6 20:10

Mark 拜读

作者: sallyshaomy 时间: 2011-5-8 09:46

楼主，so nice!

作者: desonny 时间: 2011-6-1 11:04

好资源呀，学习了

作者: huangcong1988 时间: 2011-6-1 15:19

斑竹好样的

作者: sunsong7 时间: 2011-6-1 15:28

重编程技术革命——niche reprogramming/ ~3 T. Z5 a0 ^* `: ^. @* r
http://www.stemcell8.cn/thread-40755-1-1.html8 X% j- A5 X' O: r! `+ @+ m

作者: mofatuzi 时间: 2012-5-4 20:18

楼主，请问有没有总结诱导干细胞的起始细胞的文献啊？

作者: hualin840518 时间: 2012-5-5 15:40

回复 mofatuzi 的帖子
# m5 M K2 v! c# w5 u! c
你是指哪方面，没太明白你的意思，你是说那些细胞可以用来诱导成干细胞吗，不好意思，这个没有去总结，因为iPSc只是我比较感兴趣和关注比较多的一个研究领域，我研究的方向主要是胚胎早期发育和表观遗传方向，非常抱歉！

作者: hualin840518 时间: 2012-5-5 15:42

回复 hualin840518 的帖子
3 ?5 R* O7 D2 f1 V
欢迎大家补充和总结！
些细胞可以用来诱导成干细胞这方面的文献！

作者: hualin840518 时间: 2012-5-5 15:48

回复 hualin840518 的帖子6 a+ `9 R; M' a7 R7 C7 J
3 d" S, ?# m' u5 U6 z1 i2 Z, {% [0 |
已有ips的物种' A/ I/ [/ Z9 b
http://www.stemcell8.cn/thread-43019-1-1.html) @: D4 l$ _, m2 ?" v1 M

作者: gact 时间: 2012-5-7 08:55

mark一下、、

作者: tjbone 时间: 2012-5-7 09:01

先谢谢了领导！！！！！！！！！！！

作者: huangcong1988 时间: 2012-5-7 10:59

文章都有，不过还是顶一个！

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-5-7 11:13

回复 hualin840518 的帖子
3 g, ]) Z4 o6 G
这么多包包了还要售价啊？我没关系，但是包包少的胞友伤不起啊

作者: 细胞海洋 时间: 2012-5-8 00:02

回复懵懂干细胞的帖子0 y% R( d1 N" C# l
1 {4 C# X9 I" t$ g
已经修改

作者: JOEL 时间: 2012-5-8 05:22

Bravo!4 n( y1 u n5 V1 h) U
Thanks for the hard work. Certainly, the review serving as a periodical summary of the developing exploration on iPS is helpful for the friends who are fighting in streaming with sweat.

作者: hualin840518 时间: 2012-5-8 07:53

回复懵懂干细胞的帖子5 _# w: M9 N( o6 g [8 D& c
1 _5 c% w P9 n- c% N' A0 z
这是一年前的帖子了，:L

作者: hualin840518 时间: 2012-5-8 07:57

回复细胞海洋的帖子

这个帖子很老了，我现在发帖子都是以阅读权限发的附件，没有出售的！

作者: hualin840518 时间: 2012-5-8 07:58

回复 JOEL 的帖子1 ?3 h9 g! P* B3 v) P3 ?# A
! @& [$ r0 b: [% n5 T. n7 H
Enjoy it！

作者: 细胞海洋 时间: 2012-5-8 08:01

回复 hualin840518 的帖子3 z, O, L2 q" T* N8 J* p3 W. K

:):handshake

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-5-8 09:30

回复 hualin840518 的帖子
8 \7 @! \$ y- g
:D 呵呵！！！！！！！！

作者: Damon-Salvatore 时间: 2013-5-19 10:54

以病毒为载体的诱导方法效率相对较高，但是逆转录病毒和慢病毒产生的载体基因会以很高的几率整合到宿主细胞基因组上造成插入突变，甚至将细胞诱导成癌细胞，大大影响了iPSC在组织工程与再生医学当中的应用前景。腺病毒虽然不会引起基因组整合，但是效率极低，限制这项技术在人iPSC的应用。

作者: Damon-Salvatore 时间: 2013-5-19 10:55

虽然目前基于DNA转染的一系列方法表面上是安全的，但是它们增加了基因组重组和插入突变的可能性，而且诱导效率普遍比较低。基于RNA的诱导方法可分为基于mRNA和miRNA，前者诱导效率相对较高，可是所需的mRNA获取难度太大，后者虽然所需miRNA较易获取，但是诱导效率相对前者低了很多。基于蛋白诱导的一些策略，虽然它彻底解决了外源基因与宿主细胞基因组整合而造成的突变问题，导入细胞后不久就被降解，不需要繁琐的实验操作进行外源基因沉默。但是这种方法需要多种特殊的化学处理，如丙戊酸处理等，使实验操作变得繁杂。而且，有活性的重组蛋白很难获得，想要得到纯度较高的这些蛋白难度更大。

作者: Damon-Salvatore 时间: 2013-5-19 10:59

iPSC诱导过程中，很重要的一步是使外源基因沉默。逆转录病毒载体携带的基因的沉默是细胞达到完全重编程状态的标志，在以逆转录病毒和慢病毒为载体的诱导技术中，需要组蛋白修饰，DNA甲基化等来沉默外源基因。在转座子技术中， Woltjen et al.证明了插入在被连入转座子中的2A序列之间的重编程因子被完全移除。（引用文章即附件）[attach]51977[/attach]

作者: Damon-Salvatore 时间: 2013-5-19 11:08

[attach]51989[/attach]
表格中对应的引用文献：% E% b, u, p' r2 z( U; f. M4 \
[attach]51978[/attach]. G, @5 ~ s/ f2 e4 q4 r0 c5 c
[attach]51979[/attach]9 m1 g# N7 ^. R; b8 w m
[attach]51980[/attach]
[attach]51981[/attach]: u+ ]9 z! w8 Q
[attach]51982[/attach]
[attach]51983[/attach]
[attach]51984[/attach]+ d0 f8 F( h( Q2 E
[attach]51985[/attach]
[attach]51986[/attach]) E4 j, b# i" i. n
[attach]51987[/attach]! x! u' g" t! h
[attach]51988[/attach]

补充内容 (2013-5-19 11:10):, u- l5 A7 j5 t
表格自己做的，打算在小综述里用。

补充内容 (2013-5-19 11:10):
还请大家多多指点

作者: cbjonathan 时间: 2013-5-19 19:16

回复 Damon-Salvatore 的帖子
; W" p* F. W" k- p
仁兄提到：“逆转录病毒载体携带的基因的沉默是细胞达到完全重编程状态的标志”，请问有无相关研究的文献呢

作者: Damon-Salvatore 时间: 2013-5-20 12:18

回复 cbjonathan 的帖子. A- \) ]3 a! `( w
8 z. q; E& w- B2 ~7 h
原话在文章abstract 划红线的句子。
[attach]51998[/attach]2 f& z l& L5 [/ Z8 V4 a& k
: Q3 C9 S+ G4 c# ?& a- w
版主能不能加点威望啊我还等着威望超过50，加干细胞之家的QQ群呢

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