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标题: 基质胶的有效时间问题 [打印本页]

作者: 573639471 时间: 2011-5-4 10:08 标题: 基质胶的有效时间问题

干细胞培养的feeder前要铺明胶或基质胶，这个提前铺的时间长了会失效吗？如果铺好，接种feeder，feeder长满后（比如4天）再灭活，接种干细胞，这时的基质胶会有影响吗？

作者: jefferson 时间: 2011-5-4 11:30

铺明胶最少需要半小时, 只要胶没干掉, 铺了几天的我们也用的不错.; t. }( H2 ]* l& g0 v0 O' c
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接种Feeder后,为什么要长满? 你接种的Feeder不是预先丝裂霉素或者射线处理过的吗? 你意思是把正常增殖的Feeder种在皿上, 长满后丝裂霉素或射线处理,再接种干细胞?? 没听说哪里是这么做的, 这样做工作量比较大,效率也比较低吧. 如果这种方法可行, 第一如果你是用丝裂霉素处理, 你需要洗很多遍将丝裂霉素洗脱干净, 以便不对干细胞产生影响; 第二按你说的4天Feeder长满了, 处理后能否坚持7天是个问题; 第三就是, 4天后,我们的感觉是, 明胶的作用效果已经下降了, 有时会出现贴壁性不好的情况; 第四, 你要在传干细胞的时候Feeder刚好长到合适的密度,这个时间点不好控制吧.9 h( l" N4 G8 w8 }3 ?" }

通用的稳定方法是, 将Feeder预先单独扩增, P3代以内丝裂霉素或射线处理, 然后冻存; 使用时铺了胶后一个小时就可以复苏Feeder, 按摸索好的细胞数直接接种, 第二天就可以种干细胞了.

作者: 573639471 时间: 2011-5-5 10:41

回复 jefferson 的帖子 P# g5 L7 F5 w$ ]8 E9 j
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听说灭活后冻存细胞会死很多的。复苏后等细胞贴壁马上灭活怎么样

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