干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 养细胞养得郁闷 [打印本页]

作者: lmahappy 时间: 2011-5-4 16:59 标题: 养细胞养得郁闷

好像是营养液酸度太大，很快就变黄了；或是污染支原体了，污染支原体究竟是什么样啊？高手！

作者: 细胞海洋 时间: 2011-5-4 20:24

建议上图

作者: HMC 时间: 2011-5-4 20:35

回复 lmahappy 的帖子
3 x1 t1 L& K$ f3 V2 F0 w
你这样提问，我们无法解答啊
你细胞生长状态如何

作者: yangpan521 时间: 2011-5-4 20:55

那就加点plasmoim(一种抑制支原体的药物），如果还是没有改善的话，就不是支原体的问题了，因该找其他原因

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-5-4 21:37

很快就变黄，原因可能是你的细胞密度过大。如果怀疑是支原体污染，建议你传代的时候传出来一点，然后用Hochest染一下核，看看除了细胞核之外是否还有其他的小亮点，要是有的话，可能就是支原体污染了

作者: hndxws 时间: 2011-5-4 22:01

293T的代谢也没这么快，不会是细菌污染吧？

作者: hndxws 时间: 2011-5-4 22:02

支持上图

作者: 前途似锦 时间: 2011-5-4 22:23

我前几天弄得MEF也有好多黑点，好像在轻微的动，细胞长的很慢，我直接扔了

作者: biovictor 时间: 2011-5-5 11:46

有可能是传说中的黑胶虫！

作者: biovictor 时间: 2011-5-5 11:47

有可能是传说中的黑胶虫！

作者: panyanfei 时间: 2011-5-5 12:31

对呀你养的是什么细胞会不会细胞密度太大了

作者: lanxiubala 时间: 2011-5-5 15:19

细菌污染的话培养基很容易变黄啊，这个可以用平板来检测。
而且培养基容易变黄，不一定是污染啊，我们这边肺癌A549，也是培养基一天就变黄（两天就可以长满），但是细胞形态正常，培养基中很干净，，而且检菌也是没有菌的。

作者: f5_105 时间: 2011-5-5 23:47

支原体不是培基变黄的唯一原因，图里是HOECHEST33258染色，C是有感染支原体的，E是没有感染的。

图片附件: [支原体染色] 未命名.JPG (2011-5-5 23:45, 14.93 KB) / 下载次数 120
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjY1MDJ8ZjQ5NjAwYmN8MTc0OTE3ODA3Mnww

作者: Learner 时间: 2011-5-6 08:15

检测支原体感染（mycoplasma),可用DAPI染色法，也可用PCR的方法。DAPI染色后如果细胞有一个清晰轮廓的细胞核，细胞膜周围没有着色的雾状染色物质，就是没有感染，相反如果有就是感染了。PCR法有卖成品试剂盒的，有引物和阳性对照，将长满细胞后的培养基上清做个PCR即可。

作者: future007 时间: 2011-5-6 09:38

上图，另外附上你的培养液方案，另外测一下你的培养液的PH值，看看是不是你的培养液本身的酸度就处在临界的位置，污染，没那么容易吧。个人意见

作者: zhangyan813 时间: 2011-5-6 09:42

培养液变黄也不一定也污染，看要是怎么样的黄，如果是单纯的透亮的黄色那应该是细胞生长较快，这个一般是在培养原代细胞时多见，特别是有组织块在的时候，培养液会很快变黄，但是应该是透亮的黄色。如果培养液变黄，同时变得浑浊那应该是污染了，建议扔掉，找到污染源重新开始。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2011-5-6 09:57

要么就是传的太浓，要么就真是污染了！6 ?) V- W6 u7 B7 Y+ _- {, }. M F
但是污染的话一般可以看出来，支原体污染你可以做一个支原体污染检测，很快的！- z3 b* F3 S4 I- H$ a; \/ f3 W1 s
阁下的培养液加了多少碳酸氢钠啊？

作者: robort45 时间: 2011-5-6 15:26

支原体不会搞的培养基很快黄掉的，考虑细菌污染吧，如果你培养基里有抗生素，在培养初期是看不出细菌生长的。

作者: 殆死悲爱 时间: 2011-5-6 15:31

回复 lmahappy 的帖子; ?0 y7 s5 Z3 Y1 V5 b

培养液酸度过大，很快就变黄了，不过对细胞没什么影响；染支原体的话得检测了才知道

作者: sfk06 时间: 2011-5-6 19:20

细胞若是支原体污染，通过细胞核染料染色后，背景中亮点特多，一看就知道的，向夜空中的星星

作者: wang2004k2006 时间: 2011-5-8 15:05

回复 lmahappy 的帖子5 W0 i5 i* `# x! A2 _$ G
3 }# N! n. Z# A6 K
如果是在co2培养箱培养，是因为培养液的碳酸氢钠的含量没有添加到说明书的要求，培养液没有起到缓冲的作用。建议培养液的碳酸氢钠的含量按说明书得要求添加。
支原体污染建议上图，一般支原体污染后，细胞之间的界线模糊，形态异常，但培养液的pH值变化不大

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)