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标题: 骨髓间充质干细胞直接贴壁法 [打印本页]

作者: Learner 时间: 2011-5-5 08:51 标题: 骨髓间充质干细胞直接贴壁法

我们实验室用直接贴壁法获得骨髓间充质干细胞，效果还不错。骨髓8-10ml 加入培养基HG-DMEM 10%FBS 20ml-30ml，如果用T75瓶培养，加30ML有些过多容易从瓶口溢出来我只加20ml。培养箱孵育三天不要动，也不用看（什么都看不见）。第四天换液加入新的培养基含有2ng/ml bFGF.就可以扩增。如果MSC数目够多9-10天就能长满。

作者: ljs 时间: 2011-5-5 09:10

骨髓间充质干细胞的纯度如何？

作者: Learner 时间: 2011-5-5 09:31

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还未检测！不过形态看起来挺好。

作者: nibirucome 时间: 2011-5-5 09:44

请问楼主“骨髓8-10ml”是怎么定量？

作者: xiao6tao 时间: 2011-5-5 19:36

我们也是直接骨髓贴壁培养法，简单。通过贴壁去除悬浮的杂细胞。我们是准备10ml的培养基，然后冲洗骨髓腔，在中植入培养皿中

作者: Learner 时间: 2011-5-6 08:05

本帖最后由 Learner 于 2011-5-6 08:07 编辑 + O3 Y$ a' v1 P1 y4 Z
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这要看你每次抽骨髓的获得量，有时会得到8ml有时可得到10ml.

作者: 骨道边 时间: 2011-5-7 23:07

是用高糖培养液吗？换液了之后就加bFGF会不会诱导细胞向其他细胞分化了，不能保持msc的性状啊

作者: 飞翔的十字架 时间: 2011-5-9 15:11

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8-10ml的骨髓量？多少只老鼠啊·······

作者: biotly 时间: 2011-5-9 15:47

高糖培养基会不会让细胞分化啊，我用293生产的病毒上清空白对照也能让细胞分化啊~~~~

作者: Learner 时间: 2011-5-9 16:26

回复骨道边的帖子: i7 c, U/ T( V4 N+ R# s
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bFGF的作用是维持其不分化特性，我也看很多文献用低糖，也有用高糖我两种都用过，感觉没太大差异。

作者: 生物化学zy 时间: 2011-5-9 20:26

我用一只小鼠铺板一个6孔进行培养3天后换液,之后会有很多细胞贴壁,但是感觉不是MSC,有很多杂细胞,感觉像是叠在纤维状的MSC上,没法去掉,继续培养后细胞也不咋长?我用的小鼠是5-6周日龄的.不知道楼主这种情况咋办呀?用的低糖DMEM+10%FBS

作者: 骨道边 时间: 2011-5-9 21:06

好，明日再拿一只老鼠来做，这次用大鼠了

作者: biotly 时间: 2011-5-9 22:13

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我培养的时候都没有加bFGF，没有分化的情况发生，但是换了高糖就有问题了。是不是一开始用高糖培养就不会呢？你培养的时候有没有换着用过？？
分化的细胞我用Tuj1尽然能染出阳性结果，呃，很神奇~~

作者: Learner 时间: 2011-5-10 10:47

本帖最后由 Learner 于 2011-5-10 10:48 编辑 8 X! v2 L+ m+ x8 K4 b( U/ }2 }
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回复 biotly 的帖子; ^: c& Y V9 C0 ~9 m

还没有！那你的细胞能传多少带呢？我的大约传6-7代就不行了。也许真的是应该用低糖的培养基。那是挺神奇的，你试过用别的神经干细胞marker检测吗？

作者: gaorongbest 时间: 2011-5-10 11:15

回复 xiao6tao 的帖子2 \/ T2 y) ?: F" b8 }
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你的是大鼠还是兔子？月龄是多少？我们一般都是用小瓶子接种的，没想到你们都是用大瓶子，应该月龄较大的吧，我们也是直接贴壁法培养，挺方便的

作者: xiao6tao 时间: 2011-5-10 14:35

回复 gaorongbest 的帖子9 m0 L% v1 n! e" W( d1 z3 |7 Q

4-6周的鼠啊，是大培养皿100×20mm的，不是大瓶子

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