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标题: 关于台盼蓝染色 [打印本页]

作者: conggu 时间: 2011-5-6 10:50 标题: 关于台盼蓝染色

大家在活细胞计数时，是如何使用台盼蓝的呀？是1:9混合还是1：1混合呀？

作者: LiuRoc 时间: 2011-5-6 10:53

1：9

作者: 鹭岛之滨 时间: 2011-5-6 14:51

1:9呢

作者: hualin840518 时间: 2011-5-6 16:59

回复 conggu 的帖子
& E$ z; Z, C* m$ y* k3 C, D
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
. d8 I; g" e$ e4 W9 M# a
原理：: D9 V, n5 R! K" w# h* z! X" }
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。. j4 Y: o! f" I4 K* ]

用品：
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。: Q# Q, o: v7 Z. a& v! ]
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
# @% C1 m: ]5 n; P l! h
步骤：
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）% ]. M% v3 p1 E7 H! N
2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞. I" O% s2 @- f6 `; w
6 Y3 u3 v* T; _1 g* Z4 `
结果统计： d ?/ ?& y" V, \
镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。. e9 J5 }& @: C- t- G# h9 q/ a' E
根据下式求细胞活力：% Y( X$ }# b4 \0 F: _4 m
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
" i, N' K" }5 D% h: W
注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。

作者: conggu 时间: 2011-5-9 20:26

谢谢楼上，很详细。

作者: 王乾 时间: 2011-5-10 16:21

1:1，染得更好一点

作者: tingwuyu 时间: 2011-5-10 16:38

1:9与1：1我都试过，感觉结果没什么不同，就是1:9的镜下颜色会浅一些，1:1会比较深，个人感觉1:9好些

作者: osterix 时间: 2011-5-12 13:26

1：1可能会产生干扰噪声，即背景会高一些，有时候不太好分析。1：9呢，染色浅点，区分的很好。建议1:9

作者: aibi1983 时间: 2011-5-14 13:22

建议1:9，因为1:1假阳性会很多

作者: 透明微笑 时间: 2011-5-15 21:01

建议1:9

作者: hygene 时间: 2011-5-16 08:47

细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。效果较好。$ z% h$ J3 b2 z/ f% f

作者: vivian303 时间: 2011-5-16 17:20

我们实验室 1:1和1:9都有人用，没有太大的差别

作者: jxydiandian 时间: 2011-5-16 22:10

1:9染色3-5min的效果比较好，不能时间太长，否则会使部分活细胞也染上色。

作者: lifeida 时间: 2011-5-16 22:19

本帖最后由 lifeida 于 2011-5-16 22:20 编辑 0 w5 f% S) V7 l
Q* v1 ]% B# Q8 c7 a( d
我们实验室都是用1:1的，静置2-3min，效果很好！

作者: 福牛 时间: 2011-5-16 22:59

我是稀释后1比9染色，一般静止2分钟左右观察，感觉效果不错。

作者: killua 时间: 2011-5-17 15:45

原来一直是用1：1的，但染色效果不明显，可以是因为背景颜色较深，下次试试1：9吧。个人还是认为台盼蓝染色方法准确性太差，但确实简单，其他方法成本太高。

作者: pauldong 时间: 2011-5-17 20:28

我们购买的成品的胎盘蓝试剂，说明书上是建议1:1染的，效果还可以

作者: cncpht 时间: 2011-5-19 14:27

本帖最后由 cncpht 于 2011-5-19 14:28 编辑
2 {5 w I f# F6 i0 G
5微升0.4%台盼蓝母液+5微升细胞悬液+40微升生理盐水

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 15:33

1:9好像更好用

作者: 4445655 时间: 2011-6-9 14:13

1:9要好，我们实验室都用1:9.

作者: pla269 时间: 2011-7-7 00:39

1:1，各10ul，很实用

作者: luoye1986 时间: 2011-7-7 08:30

我们一般都是1：1或1:5

作者: OBGYNob 时间: 2011-7-20 18:35

学习

作者: c05241037 时间: 2012-7-14 15:19

我们用的Sigma成品台盼蓝，4%，1:1，染色2分钟、3分钟、5分钟细胞死亡数目越来越多，到底选择几分钟比较准确呢？

作者: jiefengbing 时间: 2012-7-14 16:51

我们实验室是1:1，混匀后就观察，效果还不错，呵呵。

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