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标题: 冷冻细胞放-80度至少多久才可以放入液氮 [打印本页]

作者: HMC 时间: 2011-5-7 17:05 标题: 冷冻细胞放-80度至少多久才可以放入液氮

本帖最后由 HMC 于 2011-5-7 17:07 编辑 . J8 y5 K+ X: l, c

各位研究员：你们好！我今天冷冻了一批成纤维细胞，放到-80度冰箱3个小时了，由于有紧急事情，想请教各位研究员，冷冻细胞放-80度至少多久才可以放入液氮！谢谢！

作者: amberma 时间: 2011-5-7 17:30

24小时

作者: HMC 时间: 2011-5-7 17:32

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这么久啊

作者: w1986725 时间: 2011-5-7 18:12

过夜就可以了

作者: a86856635 时间: 2011-5-7 19:30

我们实验室都过夜

作者: yangpan521 时间: 2011-5-7 19:33

是的一般是过夜就可以了，但我个人认为-80也就是起到一个缓冲作用，使细胞慢慢的冷冻，只要细胞在-80里完全冻住了（可以通过冻存管里培养液颜色变化观察）就可以放到液氮里。

作者: ljzmy82 时间: 2011-5-7 23:35

一般过夜就可以了，-80也就是个缓冲作用

作者: zhangyan813 时间: 2011-5-7 23:50

看来大家做的都差不多，我们试实验室做一般也是在-80°放置过夜或者24小时，稍微多放几天也是没有问题的，但是没有试过最少放几个小时？

作者: 临床干细胞 时间: 2011-5-8 00:32

我们的并存程序是4度20分，零下二十度两个小时，零下八十过夜，然后放液氮里

作者: HMC 时间: 2011-5-8 08:53

明白了，谢谢大家

作者: wang2004k2006 时间: 2011-5-8 14:59

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过夜就可以了，

作者: ouyi2738 时间: 2011-5-9 01:02

看你用什么冻了，我们们用的异丙醇的冻存盒，说明是1分钟降一度，理论上2h就足够了，我们一般4h或过夜，包棉花就过夜，其实在-80不用太长时间，冻住就行了

作者: ouyi2738 时间: 2011-5-9 01:05

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程序冻存效果没有直接扔在-80里好。

作者: guosapphire 时间: 2011-5-9 01:27

关键问题不是是时间问题，是你将你的细胞放置于-80后，它多长时间可以降至-80度。因为细胞冻存复苏的原则是"慢冻快融”，慢冻可以有效防止细胞内出现冰晶，对细胞产生伤害。我们使用的冻存盒是含有异丙醇做温度缓冲的，据产品说明讲该盒子可以做到每分钟降一度的速度。就是说放120分钟基本就可以了，我试过3小时，OK。但是不知道是不是所有细胞类型3小时都OK。

作者: 王乾 时间: 2011-5-9 10:03

六个小时以上吧，一般过夜放置，最好不要超过一个月。

作者: amberma 时间: 2011-5-9 10:15

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受教了~

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-16 20:48

我们是要用棉花包裹，再放到一个泡沫盒里，直接放到－80度，过夜，然后再投入液氮中。
在－80放上几天貌似影响也不在。

作者: pauldong 时间: 2011-5-16 21:03

我们的做法是至少放4个小时就可以入液氮了，但一般都是过夜，操作方便，不用等时间

作者: idealgas 时间: 2011-5-17 14:54

楼上各层的做法都差不多啊，我们也是这样做的，用的是程序化冷冻盒，异丙醇做的缓冲剂，最短的我放了5个小时，长的可能是忘记了，放了1周左右，甚至半个月（千万不要这样，占着地方还可能会对细胞有影响，尽快转移到液氮中！）

作者: killua 时间: 2011-5-17 15:37

一般过夜就可以，但不宜过久，一周以上的话会对细胞活性有很大的影响。

作者: ww2zyl 时间: 2011-6-3 11:21

一般细胞在-80度最多能存放一个月，有人做过实验-80度放超过一个月细胞会大量死亡，所以只要不超过一个月就可以

作者: bllx58 时间: 2011-6-4 19:51

曾经做过实验，放了三周复苏出来状态都还不错，飘的很少，一般过夜即可，其实就是一个缓冲作用

作者: 骨道边 时间: 2011-6-4 20:23

我们实验室没有液氮罐，那细胞能放在-80度多长时间啊，昨天我冻存了一批，问了师姐什么时候能放到液氮罐中，师姐告诉我说我们实验室没有液氮罐，我晕掉了。难道我们的细胞比较耐抗啊

作者: 大少爷 时间: 2011-6-5 08:53

我们实验室的制备的细胞用程序降温仪降到-80度，过夜，第二天专转移到液氮灌中保存。需要用时就取出复苏，从来没出什么问题。

作者: snany 时间: 2011-6-6 13:26

至少24小时，最长不多于60天。

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